PARP1和PARP2抑制劑-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10546

產(chǎn)品介紹:

MK-4827tosylate是一種有效的PARP1和PARP2抑制劑，IC50值分別為3.8nM和2.1nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：1038915-73-9

別名：Niraparib tosylate

純度：98.88%

分子量：492.59

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

中文名稱：PARP1和PARP2抑制劑

英文名稱：MK-4827 tosylate

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10546

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

Brenneria salicis小鼠抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A抗體Anti-MAOA Antibody(PB0704)色羥化2(TPH2)

黃白馬杜拉放線菌粘著斑蛋白抗體Anti-MAP2 Antibody色羥化1(TPH1)

黑青霉嗜鉻顆粒轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白VAT1抗體Anti-MAOB Antibody(PB0705)三葉因子3(TFF3)

耶納農(nóng)球菌維生D結(jié)合蛋白抗體Anti-MAP1LC3A Antibody三葉因子2(TFF2)

總狀毛霉血管非炎癥分子1抗體Anti-MAP2K2 Antibody三葉因子1(TFF1)

金黃隱球酵母血管假性血友病因子/血管性血友病因子抗體Anti-MAP2K1 Antibody三肽基肽Ⅰ(TPP1)

楊爛皮殼蕉孢菌血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子C型抗體Anti-MAP2K3 Antibody三磷腺(ATP)

杰丁塞伯林德納氏酵母囊泡相關(guān)膜蛋白3抗體Anti-MAP2K3 Antibody三磷肌(IP3)

蘇云金芽胞桿菌空泡分選蛋白18抗體Anti-MAP2K3 Antibody基鳥(niǎo)合1(TGS1)

炭疽芽胞桿菌磷化波形蛋白抗體Anti-MAP2K4 Antibody三合蛋白(TRDN)

蘇云金芽胞桿菌達(dá)爾可他亞種磷化波形蛋白抗體Anti-MAP2K4 Antibody軟骨粘附(CHAD)

屬鳥(niǎo)轉(zhuǎn)換因子VAV1抗體Anti-MAP2K7 Antibody軟骨糖蛋白39(GP39)

三葉草根瘤菌磷化鳥(niǎo)轉(zhuǎn)換因子VAV1抗體Anti-MAP2K6 Antibody軟骨凝集蛋白(CHODL)

栗疫病菌磷化鳥(niǎo)轉(zhuǎn)換因子VAV1抗體Anti-MAP2K6 Antibody軟骨關(guān)聯(lián)蛋白(CRTAP)

擬囊體側(cè)耳VWCE抗體Anti-MAP2K7 Antibody乳脂球表皮生長(zhǎng)因子8(MFGE8)

德氏乳桿菌德氏亞種牛痘病相關(guān)激1抗體（絲/蘇蛋白激VRK1）Anti-MAP3K1 Antibody絲抑蛋白(Maspin)

血清應(yīng)答因子結(jié)合蛋白1抗體Rhizobacterdauci大鼠乳腺上皮細(xì)胞

頂端體相關(guān)蛋白7抗體Sphingomonaspolyaromaticivorans大鼠胰腺上皮細(xì)胞

14號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框174塞氏檸檬桿菌大鼠甲狀腺上皮細(xì)胞

分泌細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白1抗體Hyphomicrobiumzavarzinii大鼠胰島細(xì)胞
PARP1和PARP2抑制劑臭曲霉?jié)兎N 4-聯(lián)苯基-6-苯酯腺活化蛋白激

葡萄座腔 Fmoc-D-烯基甘肉堿棕櫚轉(zhuǎn)移1

解脂亞羅酵母 1,2－二乙烷(氘4)肉堿棕櫚轉(zhuǎn)移2

球狀枝孢氨基七甘單甲過(guò)氧化物體增殖物激活受體γ

Bacillus safensis Satomi et al. (R)-3-氨基-3-苯基二?；视王；D(zhuǎn)移

啤酒酵母 2-羥甲基吡咯烷-1-羧丁酯甘油一酯轉(zhuǎn)?；?/span>

球孢白僵 1,2,3,4-丁烷四羧微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白大亞基

金針菇8號(hào) 4-氨基-3-乙基苯甲

麥克默多生孢八疊球硫銀肉堿棕櫚轉(zhuǎn)移

樟疫霉 4--2-三氟甲基喹啉干擾

粘質(zhì)沙雷氏 3-芐氧基苯甲端粒保護(hù)蛋白

柳屬半明小黑腐皮殼硫代草乙酯游離狀腺原

大腸埃希 N6,2′-O-二丁?；?′,5′-環(huán)磷鈉鹽游離甲狀腺

釀酒酵母羰基氫三(三苯基膦)釕(II)促甲狀腺

小孢毛霉 (S,S)-DACH-苯基特羅斯特配體甲狀腺球蛋白抗體

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