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當(dāng)前位置：上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學(xué)試劑>>細胞組織染色>> 淋巴細胞分離液1.084
| 貨號 | FS-X9748 |
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產(chǎn)品介紹:
淋巴細胞分離液（Lymphocyte Separation Medium 1.084，簡稱LSM-1.084）是一種無菌的即用型分離液，基于B?yum的Ficoll-甲泛影鈉溶液做過一些改良，使得操作簡單快速且分離效率更高。本品是無菌的聚蔗糖Ficoll/泛影鈉混合溶液，密度為1.084 g/ml，內(nèi)毒素含量很低（＜0.12 EU/ml），是在嚴格控制的環(huán)境下加工的，條件符合ISO13485:2003標(biāo)準(zhǔn)和GMP認證。相對于密度為1.077 g/ml的人淋巴細胞分離液，本品適用于分離更高密度的人單個核細胞，包括外周血，臍帶血以及骨髓瘤來源的組織樣本。還適用于分離大小鼠血細胞，正因為嚙齒動物的淋巴細胞密度稍高于人淋巴細胞。 工作原理 去纖維蛋白或抗凝人血以1：1的比例用無菌生理鹽水或平衡鹽溶稀釋，小心的添加在分離液上層（不要混雜在一起），之后離心30-40min。離心過程中，差速遷移使其終形成幾個不同的細胞分層： ①聚集在管底的顆粒主要是Ficoll 聚集的紅細胞以及沉淀物； ②緊挨著上面一層的顆粒主要是粒細胞，其處于LSM-1.084溶液的滲透壓臨界，具有足夠高的密度遷移穿過LSM-1.084溶液層。 ③單個核細胞分布在血漿和LSM-1.084分離液的中間層，還包括一些沉降系數(shù)低（密度低）的顆粒，如血小板。 淋巴細胞，單核細胞和血小板不具有足夠高的密度穿透LSM-1.084分離液層，因此這些細胞在血漿和LSM-1.084分離液層聚集形成一個中間分層。吸取中間層，用平衡鹽溶短暫洗滌，以除去血小板，細胞分離介質(zhì)和血漿，就可以單個核細胞。通常情況下，分離所得的細胞中95±5%為單個核細胞，細胞存活率＞90%，回收率為60±20%。 儲存條件：4～8℃，避光 |
中文名稱：淋巴細胞分離液1.084
英文名稱：Lymphocyte separation medium1.084
產(chǎn)品規(guī)格：100ml
貨號：FS-X9748
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。
組織金屬蛋白抑制因子2(TIMP2)英文名：TIMP2 磷化Bax抗體包裝250mg
組織金屬蛋白抑制因子1(TIMP1)英文名：TIMP1 磷化癌抗雌激耐藥蛋白1抗體包裝25ml
組織蛋白Z(CTSZ)英文名：CTSZ 磷化癌抗雌激耐藥蛋白1抗體包裝5ml
組織蛋白S(CTSS)英文名：CTSS 磷化癌抗雌激耐藥蛋白1抗體包裝1g
組織蛋白L(CTSL)英文名：CTSL 磷化相關(guān)死亡促進因子抗體包裝5g
組織蛋白K(CTSK)英文名：CTSK 肌動蛋白樣蛋白6A抗體包裝100g
組織蛋白G(CTSG)英文名：CTSG 磷化紅陰離子交換蛋白1抗體包裝25g
組織蛋白D(CTSD)英文名：CTSD 磷化紅陰離子交換蛋白1抗體包裝5g
組織蛋白A(CTSA)英文名：CTSA 障礙自整合蛋白BAF抗體包裝200mg
組蛋白脫乙?；?/span>4(HDAC4)英文名：HDAC4 磷化轉(zhuǎn)錄因子MYB相關(guān)蛋白B抗體包裝1g
組蛋白脫乙酰基2(HDAC2)英文名：HDAC2 磷化轉(zhuǎn)錄因子MYB相關(guān)蛋白B抗體包裝1g
組蛋白脫乙?；?/span>1(HDAC1)英文名：HDAC1 磷化B-Raf抗體包裝250mg
組蛋白H4(H4)英文名：H4 磷化B-Raf抗體包裝1g
組蛋白H3(H3)英文名：H3 磷化B-Raf抗體包裝5g
組蛋白H2B(H2B)英文名：H2B 磷化B-Raf抗體包裝1g
二磷腺核糖基化因子6相互作用蛋白抗體干擾α14(IFNα14)MK 2206 dihydrochloride 是一種口服有效的 Akt 變構(gòu)抑制劑，抑制 Akt1/Akt2/Akt3 的 IC50 分別為 5 nM/12
淋巴細胞分離液1.084產(chǎn)氣莢膜梭 D型 2--5-甲基噻吩前列腺特異膜抗原
泡盛曲霉 4-戊基前列腺特異性抗原
磚紅鐮孢 2,6-二羥乙氨苯前梯度蛋白2
猴假單胞 環(huán)丁烷甲乙酯前心鈉肽
毛柄(金針菇) 4-磺酰苯潛伏膜蛋白1
阿魏側(cè)耳 4--4-氧代丁甲酯強啡肽
大豆慢生根瘤 AMP鈉鹽羥賴
牡丹擬盤多毛孢 beta-紫羅蘭酮羥脯
黑曲霉 1,2,3-三氟苯橋粒芯蛋白3
植物乳桿 N-乙基-N-乙基苯橋粒芯糖蛋白-1
谷棒桿 5--2-橋粒芯糖蛋白-3
大腸埃希氏 N-Boc-3-甲甲酯鞘磷脂
凍干粉 產(chǎn)腸大腸埃希氏（陽性） N-乙基-N-乙基間甲苯切除修復(fù)交叉互補基因1
光滑青霉 丁葉酯
金針菇 2,6-二-3-吡啶清道夫受體B
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