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貨號(hào)	FS-X10544

產(chǎn)品介紹:

LY2603618是一種有效的選擇性的Chk1抑制劑，IC50為7nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：911222-45-2

別名：IC-83

純度：99.61%

分子量：436.3

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

中文名稱：Chk1抑制劑(LY2603618)

英文名稱：LY2603618

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10544

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

彎梗根霉絲/蘇激受體相關(guān)蛋白抗體Anti-LSM5 Antibody神經(jīng)絲蛋白3(NEF3)

擬青霉線粒體輔色C還原核心蛋白2抗體Anti-LRTOMT Antibody神經(jīng)束蛋白(NFASC)

短密青霉未分化胚胎干轉(zhuǎn)錄因子1抗體Anti-LSM7 Antibody神經(jīng)上皮轉(zhuǎn)化基因1(NET1)

黑曲霉尾加壓2抗體Anti-LTA Antibody神經(jīng)軟骨蛋白(NCDN)

麥芽糖假絲酵母尾加壓2相關(guān)肽抗體Anti-LSM8 Antibody神經(jīng)連接蛋白3(NLGN3)

皺孢鏈霉菌荊豆凝集1抗體Anti-LTA Antibody神經(jīng)連接蛋白2(NLGN2)

普通變形桿菌泛相關(guān)蛋白1抗體（鼻咽癌相關(guān)基因20蛋白）Anti-LTBR Antibody神經(jīng)連接蛋白1(NLGN1)

哈茨木霉廣泛表達(dá)轉(zhuǎn)錄蛋白UXT抗體Anti-LTF Antibody神經(jīng)顆粒(NRGN)

紫紅曲霉泛D抗體Anti-LTK Antibody神經(jīng)介U(NMU)

環(huán)帶擬盤多毛孢珠蛋白抗體Anti-LUM Antibody神經(jīng)介S(NMS)

桔青霉尿卟啉原脫羧抗體Anti-LUM Antibody神經(jīng)介N(NMN)

嗜松青霉磷化信號(hào)淋巴活化分子CD150抗體Anti-LUM Antibody(PB0701)神經(jīng)介B(NMB)

薄花邊傘2-1泛激活2B抗體Anti-LY6A Antibody神經(jīng)膠質(zhì)蛋白(GLDN)

擴(kuò)展青霉ATP-依賴的RNA解旋p47抗體Anti-LYN Antibody神經(jīng)降壓受體2(NTSR2)

鐮刀菌等上游激因子1抗體Anti-LY6C Antibody神經(jīng)激肽A(NKA)

串珠鐮刀菌*泛化組蛋白H2AX抗體Anti-LYZ Antibody神經(jīng)鈣黏蛋白(CDH2)

中斷位點(diǎn)蛋白STIL抗體水生異常球菌大鼠子宮頸上皮細(xì)胞

紡錘體組裝異常蛋白6抗體毛霉屬（斜面）大鼠子宮平滑肌細(xì)胞

減數(shù)分裂重組蛋白SPO11抗體殺鮭氣單胞菌大鼠卵巢上皮細(xì)胞

Smad蛋白E3泛連接1抗體梭形芽孢桿菌大鼠子宮成纖維細(xì)胞
Chk1抑制劑(LY2603618)枯斑擬盤多毛孢 3-(Boc-氨基)卵泡抑

野油菜黃單胞氘代正辛烷-d18抗生物蛋白

柯奈尼亞小單孢羰酰二氫三(三苯基膦)銥(I)抗胰蛋白

黃桿 2,3-二噻吩總膽紅

膝形假單胞 (溴甲基)環(huán)丁烷總蛋白

乳片球反式二-(m)-雙[2-(二鄰甲苯基膦)芐基]乙二鈀(II)白蛋白

產(chǎn)桿 3-氟-5-(三氟甲基)血紅蛋白

Trichosporon oleaginosus 3,5-二-4-羥基吡啶白介33

白淺灰鏈霉 2--4-甲氧基吡啶透明質(zhì)

水嗜冷桿二(三環(huán)己基膦)亞芐基二化釕過氧化氫

蘇云金芽胞桿 2-甲基煙乙酯

大腸埃希氏 1,6-二苯基-1,3,5-己三烯超氧化物歧化1

腫痂鏈霉對(duì)羥基苯乙酰FK506結(jié)合蛋白12-雷帕霉相關(guān)蛋白

鮑氏志賀氏 2,2-二氟-2-(氟磺酰)醋鹽磷化外信號(hào)調(diào)節(jié)激

香菇 1-(3-氧基)-4-氟苯白介7

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