實(shí)時熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

PCR技術(shù)的定量原理：
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擴(kuò)增曲線
在Real-time qPCR中，對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于液中。
PCR檢測試劑盒：
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
小鼠肺泡巨噬；MH-S形態(tài)特性: 巨噬生長特性: 貼壁生長Anti-HES2 Polyclonal Antibody

小鼠淋巴結(jié)血管上皮；2F-2B形態(tài)特性: 上皮樣生長特性: 貼壁生長Anti-ANXA1 Polyclonal Antibody

大鼠骨髓瘤；Y3-Ag1.2.3形態(tài)特性: 淋巴母樣生長特性: 懸浮生長Anti-TP53BP2 Polyclonal Antibody

人急性淋巴白血??；CEM/C1形態(tài)特性: 淋巴母生長特性: 懸浮生長Anti-CHRNB2 Polyclonal Antibody

人視網(wǎng)膜母瘤；WERI-Rb-1形態(tài)特性: 圓形聚集成葡萄狀生長特性: 懸浮生長Anti-BCAM Polyclonal Antibody

大鼠骨肉瘤；UMR-106形態(tài)特性: 上皮樣生長特性: 貼壁生長Anti-COL10A1 Polyclonal Antibody

人結(jié)直腸癌肺轉(zhuǎn)移；T84形態(tài)特性: 上皮樣；多角生長特性: 貼壁生長Anti-CD40 Polyclonal Antibody

人胃癌；SNU-5形態(tài)特性: 上皮樣生長特性: 多聚集、懸浮生長Anti-WDFY3 Polyclonal Antibody

人肺鱗癌；NCI-H226[H226]形態(tài)特性: 上皮樣生長特性: 貼壁生長Anti-NAT10 Polyclonal Antibody

人膀胱移行瘤；RT4形態(tài)特性: 多角生長特性: 貼壁生長Anti-CMTM3 Polyclonal Antibody

人胃癌；KATOIII形態(tài)特性: 上皮樣生長特性: 貼壁生長Anti-TN1 Polyclonal Antibody

人間皮瘤；NCI-H2452[H2452]形態(tài)特性: 上皮樣；多角生長特性: 貼壁生長Anti-STRA13 Polyclonal Antibody

人急性淋巴母白血??；Molt-4形態(tài)特性: 淋巴母樣；圓形生長特性: 懸浮生長Anti-NAGA Polyclonal Antibody

人腎腺癌；769-P形態(tài)特性: 上皮樣生長特性: 貼壁生長Anti-TUFM Polyclonal Antibody

人腦星形膠質(zhì)母瘤；U-118MG形態(tài)特性: 混合形生長特性: 貼壁生長Anti-BCL2L1 Polyclonal Antibody

小鼠雜交瘤(抗CD3)；OKT3形態(tài)特性: 淋巴母樣生長特性: 半貼壁生長Anti-PDGFB Polyclonal Antibody
肺炎鏈球菌核酸檢測試劑盒大鼠纖溶酶抗纖溶酶復(fù)合物(PAP)ELISA試劑盒CyPAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

大鼠血管性血友病因子/瑞斯托霉素輔因子(VWF)ELISA試劑盒CyPAELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

大鼠凝血因子Ⅹ(FⅩ)ELISA試劑盒CyPBELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

大鼠凝血因子IX(FIX)ELISA試劑盒Cys-CELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

大鼠凝血因子Ⅷ相關(guān)抗原(FⅧ-Ag)ELISA試劑盒Cys-CELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

大鼠脂蛋白α(Lp-α)ELISA試劑盒Cys-CELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

大鼠抗α-胞襯蛋白抗體IgG/IgA(α-FodrinIgG/IgA)ELISA試劑盒Cys-CELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。

大鼠心肌營養(yǎng)素1(CT-1)ELISA試劑盒CYTAbELISAKit產(chǎn)品規(guī)格:48T/96T。