Met抑制劑(SGX-523)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X10873

中文名稱：Met抑制劑(SGX-523)

英文名稱：SGX-523

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號：FS-X10873

產(chǎn)品介紹:

SGX-523是Met抑制劑，IC50為4nM，對BRAFV599E，c-Raf，Abl和p38α無活性。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：1022150-57-7

純度：99.21%

分子量：359.41

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

谷棒桿菌小鼠可溶性CD86Anti-RPS21 Antibody人胎盤催乳(HPL)

四川散斑殼大鼠肌紅蛋白Anti-RPS25 Antibody人胎盤催乳(HPL)

嗜熱脂肪芽孢桿菌人抗麥膠蛋白/麥溶蛋白抗體Anti-RPS25 Antibody人胎兒血紅蛋白(HBF)

熱帶假絲酵母小鼠胰島Anti-RPS23 Antibody人胎兒血紅蛋白(HBF)

蠟葉曲霉大鼠血栓B2Anti-RPS27L Antibody人抗巨病抗體IgM(anti-CMV IgM)

酒色青霉人抗磷脂酰絲抗體Anti-RPS3 Antibody人抗巨病抗體IgM(anti-CMV IgM)

日光鹽場喜鹽芽孢桿菌人抗磷壁抗體Anti-RPS4Y1 Antibody人抗弓形體IgM抗體(anti-tox IgM)

賴氏毛殼小鼠低氧誘導(dǎo)因子1αAnti-RPS6KA1 Antibody人抗弓形體IgM抗體(anti-tox IgM)

黑曲霉大鼠乙酰Anti-RPS4X Antibody人抗風(fēng)疹病IgG抗體(anti-RV IgG)

大腸桿菌小鼠新生甲狀腺Anti-RPS6 Antibody人抗風(fēng)疹病IgG抗體(anti-RV IgG)

*熱脂環(huán)芽胞桿菌人抗淋巴抗體Anti-RPS6KA1 Antibody人抗EB病抗體(EBV)

分枝節(jié)桿菌大鼠促甲狀腺釋放激Anti-RPS6KA2 Antibody人抗EB病抗體(EBV)

蘭鏈霉菌大鼠抗甲狀腺球蛋白抗體Anti-RPS6KA6 Antibody人孕受體(PGR)

粉紅單端孢小鼠胰淀Anti-RPS6KA4 Antibody人孕受體(PGR)

膠韌革菌人抗巨噬抗體Anti-RPS6KB1 Antibody人新生兒促甲狀腺(N-TSH)

假諾卡氏屬人抗甲狀腺過氧化物抗體Anti-RPS6KB1 Antibody人新生兒促甲狀腺(N-TSH)

抑制劑抗體火針層孔菌（斜面）大鼠腎足突細(xì)胞（原代）

味覺感受器蛋白T2R6抗體果生鏈核盤菌（斜面）大鼠海綿體內(nèi)皮細(xì)胞

味覺感受器蛋白T2R38抗體蘇云金芽孢桿菌加拿大亞種小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞

轉(zhuǎn)錄因子12抗體彩絨革蓋菌（斜面）人胎盤滋養(yǎng)層細(xì)胞
Met抑制劑(SGX-523)橙色鏈霉李氏增肉湯(LB1,LB2)基礎(chǔ)沉默調(diào)節(jié)蛋白3

消化乳桿糖發(fā)酵基礎(chǔ)肉湯沉默調(diào)節(jié)蛋白4

產(chǎn)硫芽孢桿沉默調(diào)節(jié)蛋白5

廣西微枝李氏選擇性培養(yǎng)基基礎(chǔ)(MMA)沉默調(diào)節(jié)蛋白6

玫瑰孢鏈霉沉默調(diào)節(jié)蛋白7

香菇吖啶黃亮

鑲邊鏈霉萘啶酮維生E

雜色曲霉精葡萄糖斜面瓊脂（AGS）戌型肝炎病抗原

冷海水黃桿 T1N3肉湯鏈球抗原

枯草芽胞桿 T1N0肉湯胃蛋白

松樹紅酵母 T1N1瓊脂Ca-ATP

谷棒桿霍亂雙糖鐵瓊脂(KIA)β-防御2

空腸彎曲桿血瓊脂基礎(chǔ)去泛化

非褶目暗黃層孔嗜鹽選擇性瓊脂流行性腹瀉病IgG抗體

耐壓希瓦氏蔗糖瓊脂流行性腹瀉病IgA抗體

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