當(dāng)前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> 泛PI3K/mTOR激酶抑制劑(VS-5584)
貨號 | FS-X10975 |
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英文名稱:VS-5584
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
貨號:FS-X10975
產(chǎn)品介紹:
VS-5584是一種泛PI3K/mTOR激酶抑制劑,抑制PI3Kα,PI3Kαmt H1047,PI3Kβ,PI3Kδ,PI3Kγ和mTOR,IC50分別為2.6nM,3.3nM,21nM,2.7nM,3nM和3.4nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:1246560-33-7 別名:SB2343 純度:99.57% 分子量:354.41 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
泡盛曲霉顯影液試劑Escherichia coli小鼠脫氫表雄(DHEA)
斑玉蕈(真姬菇、蟹味菇)定影液試劑Escherichia coli小鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)
鏈格孢菌萘染色試劑盒Escherichia coli小鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)
炭黑曲霉TMB 2HCl 3,3’5,5’-四甲基聯(lián)二鹽Escherichia coli小鼠內(nèi)皮脂肪(EL)
擬青霉硝纖維膜(NC膜;膜孔徑0.45um)Escherichia coli小鼠內(nèi)皮脂肪(EL)
元蘑特產(chǎn)1號PVDF膜/二氟化樹脂膜(膜孔徑:0.45um)Escherichia coli小鼠碳酐(CA)
啤酒酵母弗氏*佐劑(美國SIGMA)Escherichia coli小鼠碳酐(CA)
鏈格孢屬弗氏不*佐劑(美國SIGMA)Escherichia coli小鼠降鈣基因相關(guān)肽(CGRP)
殼菌超低范圍蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)(3.3-20.1kDa)/5條帶Escherichia coli小鼠降鈣基因相關(guān)肽(CGRP)
大腸埃希菌低范圍蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)(14.4-97.4KDa)/5條帶Escherichia coli小鼠胃動(MTL)
茶褐斑盤多毛孢預(yù)染寬范圍蛋白質(zhì)分子量標(biāo)準(zhǔn)(19-117KD)/6條帶Escherichia coli小鼠胃動(MTL)
葡萄座腔菌預(yù)染低范圍蛋白質(zhì)分子量Marker(14.4-97.4kDa)/6條帶Escherichia coli小鼠生長抑(SS)
嗜熱脂肪地球芽胞桿菌XMOPSEscherichia coli小鼠生長抑(SS)
異常漢遜酵母超敏可逆型蛋白染色試劑盒Escherichia coli小鼠血纖蛋白原(Fbg)
大腸埃希氏桿菌可逆型蛋白轉(zhuǎn)移膜染色液Escherichia coli小鼠血纖蛋白原(Fbg)
廈門假單胞菌可逆型蛋白轉(zhuǎn)移膜染色液Escherichia coli小鼠血小板活化因子(PAF)
EGR1結(jié)合蛋白2抗體虎皮粘蓋牛肝菌豬小腸上皮細(xì)胞
NK2轉(zhuǎn)錄樣蛋白B抗體粘蓋牛肝菌大鼠腎足細(xì)胞
心臟特異性同源盒轉(zhuǎn)錄因子NKX2.5抗體彩色豆馬勃轉(zhuǎn)化人肝上皮細(xì)胞
核小體結(jié)合蛋白1抗體豹皮香菇小鼠顱頂前骨細(xì)胞亞克 14
泛PI3K/mTOR激酶抑制劑(VS-5584)乳粉 沙門氏(陽性 Neochamaejasmine A激動
棘孢青霉 Hypoglaunine A半胱
兔出血癥病 Toxyloxanthone D抗
Pseudomonas koreensis Gambogin腸激
地衣芽孢桿 Isogambogenin精
香菇 Reneilmol亞精
枯草芽孢桿 Isolintetralin腐
膠質(zhì)芽孢桿(可以訂購) Pluviatolide尸
阿魏側(cè)耳 木二糖多聚球蛋白受體
慢生根瘤 Bursehernin轉(zhuǎn)化生長因子β1
相思根瘤 Curcumenone肌原纖蛋白
柱形胞鏈霉 Pasakbumin B過氧化物體增殖因子活化受體γ
埃及無色需堿 Bryonolol黑色代謝
球孢白僵 Nigranoic acid11-酮
乳桿屬 Sagittatoside B饑餓
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