ERK1和ERK2活性抑制劑(SCH772984)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10288

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：ERK1和ERK2活性抑制劑(SCH772984)

英文名稱：SCH772984

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

貨號：FS-X10288

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：SCH772984

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg

SCH772984有效抑制ERK1和ERK2活性，IC50分別為4和1nM。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：942183-80-4

純度：98.06%

分子量：587.67

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

香菇基末端激1/2抗體Human PSAT1 胰島樣因子3(INSL3)

假單胞菌基末端激1/2/3抗體Human PSD2 胰島樣生長因子結合蛋白7(IGFBP7/MAC25/PSF)

約氏乳桿菌基末端激1/3抗體Human PSKH2 胰島樣生長因子結合蛋白5(IGFBP-5)

產(chǎn)單核李氏桿菌連接蛋白JPH4抗體Human PSMA/GCPII 胰島樣生長因子結合蛋白4(IGFBP-4)

平菇組蛋白去甲基轉移JMJD7抗體Human BECN1(Beclin-1) 胰島樣生長因子結合蛋白3(IGFBP-3)

灰葡萄孢磷化原癌基因c-Jun抗體Human PSMA1 胰島樣生長因子結合蛋白2(IGFBP2)

拉曼傘狀霉磷化活化蛋白激D抗體Human PSMA6 胰島樣生長因子結合蛋白1(IGFBP-1)

枯草芽孢桿菌磷化活化蛋白激B抗體Human PSMA4 胰島樣生長因子結合蛋3(IGFBP-3)

中國葡萄座腔菌磷化活化蛋白激B抗體Human PSMA3 胰島樣生長因子結合蛋2(IGFBP-2)

茶擬莖點霉磷化組蛋白去甲基化JMJD2B抗體Human PSMA2 胰島樣生長因子結合蛋1(IGFBP-1)

隱紅堿線菌絲裂原活化蛋白激相互作用蛋白2抗體Human PSMA7 胰島樣生長因子2受體(IGF-2R)

硫磺菌絲裂原活化蛋白激相互作用蛋白3抗體Human PSMB1 胰島樣生長因子2(IGF-2)

北方蜜環(huán)菌磷化基末端激1/2/3抗體Human PSMA8 胰島樣生長因子2 mRNA結合蛋白2(IGF2BP2)

地衣芽孢桿菌磷化蛋白質(zhì)酪激JAK-1抗體Human MYL9(Myosin regulatory light polypeptide 9) 胰島樣生長因子1(IGF-1)

西蕃蓮莖基腐病基末端激2抗體PSMB10(Proteasome subunit beta type-10) 胰島受體底物2(IRS-2)

大腸埃希菌連接介導調(diào)節(jié)蛋白抗體Human PSMB11 胰島受體底物1(IRS1)

鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)吉馬

小單孢菌屬Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)異鉤藤堿

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(GC)(T)鉤藤堿
ERK1和ERK2活性抑制劑(SCH772984)黑木耳煙正丁酯骨涎蛋白

松口蘑 2-氨基異煙甲酯受磷蛋白

Corynebacterium urealyticum 硫代二雙十八酯HAX-1蛋白

中慢生華癸根瘤 4-氨基-2-甲甲酯肌質(zhì)網(wǎng)鈣泵2α亞型

殺鮭氣單胞 4-溴-3-多巴受體D3

糙孢籃狀 L-異亮叔丁酯鹽鹽可溶性補體激活產(chǎn)物SC5b9

彎孢 3-甲氧基喹啉組織蛋白L

谷棒桿 1-氨基-4-甲基哌核因子κB受體活化因子

佛羅里達側耳 3,6-二溴-1,2-苯二傷門氏抗體

葡萄座腔 α-環(huán)乙酮抗肌聯(lián)蛋白抗體

假單胞 6-喹喔啉羧肌聯(lián)蛋白

黑曲霉 2-溴-3-甲苯纖溶

波蘭青霉環(huán)己六和精

猴頭 3-氨基己內(nèi)狂犬病特異性IgA抗體

蘇云金芽胞桿 1,1-環(huán)烷二甲二甲酯肝鈉
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)