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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>核酸檢測(cè)試劑盒>>熒光PCR法>> 50T寨卡(zika)病毒核酸檢測(cè)試劑盒
對(duì)蝦黃頭病病毒(YHV)核酸定性檢測(cè)試劑盒
實(shí)時(shí)熒光定量PCR:
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限,實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度,并記錄在電腦軟件之中,通過(guò)對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)獲得定量結(jié)果。因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR無(wú)需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的:
1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí),剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期(對(duì)數(shù)期),此時(shí)微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性,即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線(xiàn)性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線(xiàn)性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測(cè)定,因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴(lài)的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,重現(xiàn)性*定量方法,已得到的*,廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測(cè)等諸多領(lǐng)域。?
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱(chēng):寨卡(zika)病毒核酸檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品貨號(hào):FS-P10501
產(chǎn)品分類(lèi):熒光PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門(mén)。
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏 PCR檢測(cè)試劑盒 。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無(wú)到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4.PCR的電泳檢測(cè):如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
定量PCR方法:
a、競(jìng)爭(zhēng)法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板。在同一反應(yīng)管中,待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增(其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,而待測(cè)模板不被酶切,可通過(guò)電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開(kāi),分別測(cè)定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí),內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長(zhǎng)度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開(kāi)來(lái),分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度,以?xún)?nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體-辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn),若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn),也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的。
PCR的反應(yīng)條件:
因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小,設(shè)定25~30個(gè)循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少,擴(kuò)增量不足;如果循環(huán)次數(shù)太多,則會(huì)出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預(yù)備實(shí)驗(yàn)可2℃間隔進(jìn)行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時(shí),每kbp大體可設(shè)定30秒~1分鐘;當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時(shí), 時(shí)間設(shè)定可稍長(zhǎng)一些。通常,Anneal溫度太高,有時(shí)會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物;Anneal溫度太低時(shí),容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外,Extension時(shí)間太短時(shí),會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物或者會(huì)有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成;而Extension時(shí)間太長(zhǎng)時(shí),會(huì)出現(xiàn)Smear。
-765℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
紫紅曲霉生長(zhǎng)條件: 30-35℃培養(yǎng)基: 0013提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法;礦物油法
玫瑰色鏈霉菌微生物代謝調(diào)控研究模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 39生長(zhǎng)條件: 28℃
地衣芽孢桿菌培養(yǎng)基: 33模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 37℃ -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;其他
白刺鏈霉菌培養(yǎng)基: 0027代謝產(chǎn)物具有抗真菌活性。提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;礦物油法;定期移植法
人蒼白桿菌培養(yǎng)基: 33模式菌株: no土樣提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 37℃ -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;其他
米曲霉培養(yǎng)基: CM0085大曲酒。提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 28-30℃ 真空冷凍干燥法
-766℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
枯草芽孢桿菌生長(zhǎng)條件: 28培養(yǎng)基: 141根表提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no 定期移植法
土生類(lèi)諾卡氏菌生長(zhǎng)條件: 25℃培養(yǎng)基: 832提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法
白色葡萄球菌研究教學(xué)分類(lèi)模式菌株: no雞腎臟提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2培養(yǎng)基: 335生長(zhǎng)條件: 37
曲霉屬菌種培養(yǎng)基: CM0014模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 26C 液氮超低溫凍結(jié)
ivcas7.00061模式菌株: no安全等級(jí): 2種屬: Bacillus│cereus土壤提供形式: 凍干物培養(yǎng)基: 0002生長(zhǎng)條件: 30℃
紅平紅球菌培養(yǎng)基: 33微生物脫硫提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 30℃ -80℃冰箱凍結(jié)法
-767℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
ACCC10718=CGMCC1.8907=DSM22170模式菌株: yes安全等級(jí): 1種屬: Paenibacillus│hunanensis sp. nov.雜交水稻種子提供形式: 凍干物培養(yǎng)基: CM0033生長(zhǎng)條件: 28℃
5-降冰片烯-2-羧甲酯 三(4-基)膦 溴化基三基膦
2-溴-5-硼 溴化基三基膦 二溴三基膦
3--4-硝基 二溴三基膦 三(4-嗎啉基)氧化膦(TMPO)
2--3-噻吩 三(4-嗎啉基)氧化膦(TMPO) 烯丙基二基膦
Bis(trimethylsilyl)acetylene 二(基甲硅烷基)乙炔 14630-40-1
1-Hexyne 1-己炔 693-02-7
3-Methyl-1-pentyn-3-ol 3-甲基-1-戊炔-3-醇 77-75-8
Trimethylsilylacetylene 基硅基乙炔 1066-54-2
大鼠載脂蛋白A2(apo-A2)ELISA試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人雄(ASD)免疫試劑盒 Human Androstenedione,ASD ELISA Kit
人抗BP180抗體(BP180-Ab)ELISA試劑盒 ,英文名: BP180-Ab ELISA Kit
RatLeukoieneC4,LT-C4ELISA試劑盒大鼠白三烯C4(LTC4)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumangranzymesA,Gzms-AELISA試劑盒人顆粒酶A(Gzms-A)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
HumanLDL-ICELISAKit人低密度脂蛋白免疫復(fù)合物(LDL-IC)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
寨卡(zika)病毒核酸檢測(cè)試劑盒蝙蝠葛524-17-4中文別名:北豆根
英文名:Dauricine
登錄號(hào):524-17-4
分子式:C38H44N2O6
分子量:624.32
分子結(jié)構(gòu):
外觀:略微黃色無(wú)定形體
規(guī)格:20mg/支
純度:≥ 98%
用途:用于含量測(cè)定/鑒定/藥理實(shí)驗(yàn)等。
提取來(lái)源:防己科植物蝙蝠葛(山豆根)的根莖
溶解性:溶于乙醇、及,略微溶于
熔點(diǎn):115℃
旋光度:-139°()
藥理藥效:降低自律性和心肌興奮性,并可減慢心率、抑制心肌收縮力。具有起效快、恢復(fù)慢的特點(diǎn)。由胃腸道吸收,1-2h達(dá)血藥濃度峰值,經(jīng)糞便和尿排出。 本品是一種廣譜的抗心律失常藥,適用于快速型心律失常,尤其對(duì)房性、交界性和室性早搏效果較佳;對(duì)預(yù)激綜合征伴室性心動(dòng)過(guò)果也好;但對(duì)房撲和房顫效果較差。
貯存條件: 4℃冷藏、密封、避光
有效期: 2年
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