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當前位置：上海撫生實業(yè)有限公司>>細胞生物學試劑>>抑制劑激活劑>> EGFR/HER2抑制劑
| 貨號 | FS-X10542 |
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中文名稱：EGFR/HER2抑制劑
英文名稱：Afatinib dimaleate
產品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg
貨號：FS-X10542
產品介紹:
Afatinib dimaleate是一種不可逆的EGFR/HER2抑制劑，有效作用于野生型和突變型EGFR和HER2，作用于EGFRwt，EGFRL858R，EGFRL858R/T790M和HER2，IC50分別為0.5nM，0.4nM，10nM和14nM。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！ 號：850140-73-7 別名：BIBW 2992MA2;BIBW2992;Afatinib 純度：99.81% 分子量：718.08 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
培養(yǎng)操作步驟：
1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)： 1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??； 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置； 3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化； 4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)； 5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)； | 二、免疫熒光鑒定： 1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min； 2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min； 3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min； 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜； 5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h； 6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。
8、結果分析
a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
新疆鹽地桿菌線粒體脫偶連蛋白2抗體Anti-LIMK2 Antibody神經營養(yǎng)因子4(NT4)
擴展青霉線粒體脫偶連蛋白3抗體Anti-LIMK1 Antibody神經營養(yǎng)因子3(NT3)
丁梭菌UBX結構域域蛋白D2抗體Anti-LIF Antibody(PB0067)神經型一氧化氮合(NOS1)
紅色蠟蘑泛硫酯L3抗體Anti-LMAN1 Antibody神經酰激(CERK)
側孢短芽孢桿菌泛硫酯L1+3抗體Anti-LIN28A Antibody神經纖維網蛋白2(NRP2)
大腸桿菌人狀瘤病E6相關蛋白抗體Anti-LIPC Antibody神經纖維網蛋白1(NRP1)
膠孢泛蛋白連接Q1抗體Anti-LMNB2 Antibody神經纖維2(NF2)
大腸埃希氏菌泛蛋白連接U抗體Anti-LMO1 Antibody神經纖維1(NF1)
嗜假諾卡氏菌泛載體蛋白L6抗體Anti-LMO2 Antibody神經黏附分子(NCAM)
禾谷鐮孢菌*泛激活2H抗體Anti-LONP1 Antibody神經外營養(yǎng)蛋白4(NXPH4)
嗜乳桿菌泛蛋白連接G1抗體Anti-LMTK3 Antibody神經外營養(yǎng)蛋白3(NXPH3)
棒曲霉泛蛋白連接E1抗體Anti-LOC134147/CMBL Antibody神經外營養(yǎng)蛋白2(NXPH2)
枯草芽孢桿菌枯草亞種泛蛋白連接E3抗體Anti-LOC134147/CMBL Antibody神經外營養(yǎng)蛋白1(NXPH1)
Marisediminicola泛蛋白連接2E2抗體Anti-LOX Antibody神經突蛋白1(NRN1)
黃絮鱗鵝膏菌泛蛋白連接D4抗體Anti-LOXL2 Antibody神經調節(jié)肽U受體1(NMUR1)
環(huán)狀芽胞桿菌泛蛋白連接D3抗體Anti-LOR Antibody神經調節(jié)4(NRG4)
SET結合蛋白1抗體熱紫鏈霉菌大鼠腎上皮細胞
電壓門控鈉通道5α抗體巴氏生孢八疊球菌大鼠膀胱平滑肌細胞
沉默調節(jié)蛋白5抗體大腸桿菌BS-3234大鼠腎小管上皮細胞
葡萄糖轉運蛋白4增強因子抗體膿腫分枝桿菌大鼠腎足突細胞
EGFR/HER2抑制劑皺膜假絲酵母 5--3-支原體
泰安羧利用桿 變藍白痢雞傷寒抗體
長雙歧桿 甘氨酰甘芐酯對甲苯磺鹽副嗜血桿
玫瑰色熱微 甘芐酯鹽鹽P53蛋白
球毛殼 4-氟苯氧基乙酰肼H9型病
Roseivivax isoporae 4-(三氟甲氧基)芐傷門氏抗體
蠟蚧 3,5-二硝基-L-酪副傷門氏抗體
乳乳球乳亞種 1-乙炔基環(huán)戊禽呼腸孤病
貝倫格葡萄座腔 4--3-(三氟甲基)苯甲禽痘病
三葉草根瘤 Tyr-Phe禽腦脊髓炎病
堅強芽孢桿 蘇丹藍II禽網狀內皮組織增生癥病
破傷風梭 對硝基肉桂禽白血病病
纖細芽孢桿 2,2-二甲基琥珀酐傳染性法氏囊病
桃色歐文氏 4-溴苯鄰二傳染性喉氣管炎病
大腸埃希 (S)-(+)-5-羥甲基-2-吡咯烷酮禽呼腸孤病抗體
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