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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> EGFR抑制劑(EGF816)
貨號(hào) | FS-X10540 |
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產(chǎn)品介紹:
EGF816是一種新穎的EGFR抑制劑,對(duì)EGFR(L858R/790M)突變體的Ki和Kinact值分別為31nM和0.222min?1。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1508250-71-2 別名:Nazartinib 純度:99.85% 分子量:495.02 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
中文名稱:EGFR抑制劑(EGF816)
英文名稱:EGF816
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10540
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
蠟狀芽孢桿菌泛結(jié)合E2蛋白A抗體Anti-LCN2 Antibody腎腫瘤抗原(RAGE)
美澳型核果褐腐病菌泛結(jié)合E2O抗體Anti-LCN2 Antibody腎小球蛋白(GLMN)
假臍菇泛蛋白連接J2抗體Anti-LCN2 Antibody腎損傷分子1(Kim1)
枯草芽孢桿菌泛蛋白連接M抗體Anti-LCN2 Antibody(PB0643)腎(REN)
肉色迷孔菌泛蛋白連接W抗體Anti-LCP1 Antibody腎上腺髓質(zhì)受體(AMR)
普利茅斯沙菌同源蛋白UNCX抗體Anti-LDHA Antibody(PB1129)腎上腺髓質(zhì)2(ADM2)
魯考弗美奇酵母UL16結(jié)合蛋白3抗體Anti-LDHB Antibody(PB1130)腎上腺能受體α2C(ADRα2C)
檸檬兩面神菌去泛化22抗體Anti-LEP Antibody腎上腺能受體α1A(ADRα1A)
深藍(lán)紫色桿菌RNA聚合I抗體Anti-LEP Antibody腎母瘤蛋白1(WT1)
根瘤菌尿鹽重吸收轉(zhuǎn)運(yùn)子1抗體Anti-LDLR Antibody腎(RNLS)
蘇云金芽孢桿菌肯尼亞亞種囊泡轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白Use1抗體Anti-LEP Antibody腎連蛋白(NPNT)
Paecilomyces formosus上游結(jié)合蛋白1抗體Anti-LEP Antibody腎結(jié)核蛋白4(NPHP4)
福氏志賀氏菌內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜蛋白UNC93B抗體Anti-LGALS1 Antibody腎膠原凝集1(CLK1)
金頂側(cè)耳神經(jīng)突起誘導(dǎo)因子受體UNC5B抗體Anti-LEPR Antibody腎胱7(NPHP7)
總狀共頭霉神經(jīng)突起生長(zhǎng)誘導(dǎo)因子受體UNC5B抗體Anti-LEP Antibody腎胱5(NPHP5)
層出鐮刀菌神經(jīng)突起生長(zhǎng)誘導(dǎo)因子受體UNC5D抗體Anti-LGALS1 Antibody型胱癥蛋白(CTNS)
肌脂蛋白抗體長(zhǎng)雙歧桿菌嬰兒亞種大鼠主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞
鞘激2抗體宋內(nèi)氏志賀氏菌大鼠冠狀動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞
絲/蘇蛋白激3抗體紫色色桿菌(平板)大鼠心肌細(xì)胞
α維生E相關(guān)蛋白抗體光滑假絲酵母大鼠腎小球內(nèi)皮細(xì)胞
EGFR抑制劑(EGF816)大豆莖潰瘍 1-Boc-3-基-4-吡咯烷酮H5N1
泛養(yǎng)副球 N-芴甲氧羰基-L-4-苯脂肪結(jié)合蛋白
百脈根中間根瘤 Fmoc-3-(3-吡啶基)-L-外脂肪結(jié)合蛋白
赭色擲孢酵母 Z-4-Fluoro-Phe-OHα3S轉(zhuǎn)移
球形阜孢 4 -(4、5二苯2咪唑基)胰高血糖樣肽1
枯草芽孢桿 1-溴-2-(二氟甲氧基)苯可溶性白介2受體
地衣芽孢桿 2-(三氟甲氧基)苯甲同型半胱
類干酪乳桿類干酪亞種 3,3,4,4,5,5,6,6,7,7,8,8,8-十三氟辛基烯酯卵清蛋白
嗜鹽喜鹽芽胞桿 2-溴-4-(三氟甲基)吡啶谷轉(zhuǎn)氨
窄食單胞 4--2-(三氟甲氧基)苯谷草轉(zhuǎn)氨
串珠鐮孢 3-氨基-5-環(huán)基-1H-吡唑滑液囊支原體抗體
約氏不動(dòng)桿 2,5-二氟苯肼鹽鹽球蛋白
固氮 3-氨基異噁唑溶血
韓國(guó)游動(dòng)微 乙酰酮鋯堿性磷
單格孢屬 2-溴-5-苯甲腫瘤壞死因子受體1
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