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貨號 | FS-X10871 |
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中文名稱:Chk1抑制劑(CHIR-124)
英文名稱:CHIR-124
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10871
產(chǎn)品介紹:
CHIR-124是一種有效的,選擇性的Chk1抑制劑,IC50值為0.3nM;同時可有效抑制PDGFR和FLT3,IC50值分別為6.6nM和5.8nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:405168-58-3 純度:98.77% 分子量:419.91 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
栗疫菌小鼠內(nèi)皮型一氧化氮合成3Anti-RPL18 Antibody人維生K1(VK1)
細鏈格孢大鼠Ⅲ型前膠原肽Anti-RPL3 Antibody人維生K1(VK1)
胡椒樹青霉大鼠Ⅱ型膠原Anti-RPL28 Antibody人維生B12(VB12)
紅霉擬無枝菌人抗網(wǎng)硬蛋白抗體Anti-RPL30 Antibody人維生B12(VB12)
桑葉盤孢小鼠膽固Anti-RPL31 Antibody人維生D3(VD3)
金黃殼囊孢菌小鼠促黃體激Anti-RPL31 Antibody人維生D3(VD3)
嗜熱嗜脂肪地芽孢桿菌人抗突變型瓜波形蛋白抗體Anti-RPL30 Antibody人維生D2(VD2)
微黃八疊球菌大鼠維生CAnti-RPL34 Antibody人維生D2(VD2)
德爾布有孢圓酵母大鼠維生B6Anti-RPL36 Antibody人維生E(VE)
檸檬色節(jié)桿菌小鼠血管緊張原Anti-RPL35 Antibody人維生E(VE)
絮邊蘑菇人抗髓磷脂抗體IgAAnti-RPL37 Antibody人維生A(VA)
運動節(jié)桿菌小鼠熱休克蛋白60Anti-RPL37A Antibody人維生A(VA)
稀褶乳菇大鼠Ⅰ型膠原Anti-RPL36 Antibody人鳥交換因子(GEF)
大腸埃希菌人抗突變型瓜波形蛋白抗體Anti-RPL39 Antibody人鳥交換因子(GEF)
布魯氏菌病全乳環(huán)狀反應(yīng)抗原人抗髓磷脂抗體IgAAnti-RPL3L Antibody人維生D受體(VD R)
枯草芽孢桿菌大鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽Anti-RPL39L Antibody人維生D受體(VD R)
轉(zhuǎn)錄因子THOC2抗體竹黃(斜面)胃癌耐藥細胞株
睪丸特異蛋白抗體膠孢(斜面)原代細胞
5色羥化2抗體溶藻弧菌人膀胱成纖維細胞
硫氧還蛋白11抗體鏈格孢菌(斜面)大鼠軟骨細胞
Chk1抑制劑(CHIR-124)Penicillium 卵黃瓊脂培養(yǎng)基弓形蟲抗體
干巴* 檢定培養(yǎng)基8號副傷門氏抗體
大腸埃希 檢定培養(yǎng)基7號低氧誘導(dǎo)因子1
季也蒙畢赤酵母 檢定培養(yǎng)基4號瘟病非結(jié)構(gòu)蛋白NS2抗體
柑橘炭疽盤孢 葡萄糖蛋白胨培養(yǎng)基硫雌酮
雅致放射毛霉 酪胨瓊脂前列腺F2a
食砜節(jié)桿 甘露鹽瓊脂甲狀旁腺
粉被蟲草 普通瓊脂斜面培養(yǎng)基(pH8.0-8.2)25羥基維生D3
美澳型核果褐腐病 肉湯瓊脂培養(yǎng)基肉絳蟲
釀酒酵母 玫瑰紅鈉瓊脂白介2受體α
黃桿 檢定培養(yǎng)基3號囊尾蚴IgG抗體
生活飲用水 pH 值 檢定培養(yǎng)基2號(低pH)胰脂肪
黏液桿 檢定培養(yǎng)基2號(高pH)圓環(huán)病抗體
擬莖點霉 檢定培養(yǎng)基1號(低pH)戊肝病抗體
*蛹蟲草 檢定培養(yǎng)基1號(高pH)流感病抗體
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