當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> BMPI型受體激酶抑制劑
貨號(hào) | FS-X10539 |
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培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
中文名稱:BMPI型受體激酶抑制劑
英文名稱:LDN193189 Hydrochloride
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg
貨號(hào):FS-X10539
產(chǎn)品介紹:
LDN193189hydrochloride是一種選擇性的BMPI型受體激酶抑制劑,抑制BMP I型受體ALK2和ALK3的轉(zhuǎn)錄活性(IC50分別為5nM和30nM),對(duì)TGF-β I型受體ALK4,ALK5和ALK7具有微弱的作用效果(IC50≥500nM)。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1062368-62-0 純度:99.68% 分子量:552.33 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
紅曲霉UBXN2B蛋白抗體Anti-LAMP1 Antibody生長激促分泌受體(GHSR)
疣孢馬杜拉放線菌上調(diào)基因4抗體(N端)Anti-LASP1 Antibody生長激2(GH2)
根霉泛蛋白抗體Anti-LAT Antibody生長關(guān)聯(lián)蛋白43(GAP43)
洋蔥曲霉泛特異性蛋白28抗體Anti-LAYN Antibody生長分化因子9(GDF9)
節(jié)桿菌尿激型纖溶原激活因子抗體Anti-LATS1 Antibody生長分化因子5(GDF5)
翹鱗傘尿鹽重吸收轉(zhuǎn)運(yùn)子1抗體Anti-LAT2 Antibody生長分化因子3(GDF3)
熱帶假絲酵母14號(hào)染色體開放閱讀框130抗體Anti-LBP Antibody生長分化因子11(GDF11)
棒桿菌屬去泛化3抗體Anti-LBR Antibody生長分化因子1(GDF1)
巴西果小克銀漢霉突觸囊泡融合蛋白Unc18-3抗體Anti-LBP Antibody生物酰(BTD)
片球菌屬泛蛋白連接E3α2抗體Anti-LCAT Antibody生精蛋白Ⅱ(SEMG2)
水管致黑棲熱菌腫瘤抑制基因UVRAG抗體Anti-LCAT Antibody生精蛋白Ⅰ(SEMG1)
爪哇青霉泛結(jié)合UFC1抗體Anti-LBP Antibody生肌因子6(MYF6)
紫色紅曲泛結(jié)合E2J1抗體Anti-LCAT Antibody生肌因子5(MYF5)
大腸埃希氏菌輔色C還原核心蛋白1抗體Anti-LCN1 Antibody滲透性糖蛋白(Pgp)
釀酒酵母核蛋白95抗體Anti-LCN2 Antibody滲出性玻璃體視網(wǎng)膜病變基因2(EVR2)
芽孢八疊球菌屬泛結(jié)合E2變異體1抗體Anti-LCK Antibody腎足蛋白(NPHN)
新型血小板相關(guān)血管內(nèi)皮分泌蛋白SCUBE1抗體淋病奈瑟菌大鼠血管內(nèi)皮細(xì)胞
應(yīng)激誘導(dǎo)分泌蛋白1抗體層出鐮刀菌(斜面)大鼠腸微血管內(nèi)皮細(xì)胞
抗腫瘤蛋白ANUP抗體淡紫色擬青霉(斜面)大鼠主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞
琥珀亞基B560抗體層出鐮刀菌大鼠大隱靜脈內(nèi)皮細(xì)胞
BMPI型受體激酶抑制劑宇佐美曲霉 6-氨基鄰甲酮還原1-B10
高羊肚 1,4-氘代二氧六環(huán)促黃體
膨大彎頸霉 2-(N-Fmoc)-氨基-1,3-丁二蛋黃脂肪
秦氏蜜環(huán) Tris(6,6,7,7,8,8,8-heptafluoro-2,2-dimethyl-3,5-oc膽固
巨型艾美耳球蟲 5-氧化凋亡相關(guān)因子
巨枝膝梗霉 4-溴對(duì)三聯(lián)苯飽和脂肪
麥根腐平臍蠕孢 3,4-二氨基苯甲鈣
乳片球 L-纈乙酯鹽鹽磷
中國臺(tái)灣根霉 雙(2,2,6,6-四甲基-3,5-庚二酮)鋇 水合物瘟病
靈芝 3--4-病
彎孢 3--4-甲氧基苯馬立克病抗體
鹽水海桿狀 1,2-二氨基蒽醌傳染性支氣管炎病
白地霉 3-甲基環(huán)戊酮病H5亞型抗體
豌豆根瘤 N-(甲基)鄰苯二甲酰亞病H5亞型
雞傷門氏 新戊二二縮水甘油H5N1IgG抗體
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
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