特異性雌激素作用抑制劑-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10285

中文名稱：特異性雌激素作用抑制劑

英文名稱：Fulvestrant

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10285

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：Fulvestrant

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg

Fulvestrant是一種有效的特異性雌激素作用抑制劑，作用于雌激素受體(Estrogen Receptor)，IC50為9.4nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：129453-61-8

別名：ICI 182780;ZD 182780;ZD 9238;ZM 182780

純度：99.89%

分子量：606.77

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

慢生根瘤菌胰島樣生長(zhǎng)因子結(jié)合蛋白樣1抗體Human PTBP2 抑瘤M(OSM)

嗜松青霉免疫球蛋白D重鏈保守區(qū)抗體Human PSTPIP1 異質(zhì)性胞核核糖核蛋白R(shí)(hnRNP R)

膠孢IV型己糖激抗體Human PTBP1 異質(zhì)性胞核核糖核蛋白P2(hnRNP P2)

大腸埃希氏菌宿主免疫球蛋白lambda樣肽1抗體Human PTCD3 異質(zhì)性胞核核糖核蛋白M(hnRNP M)

美澳型核果褐腐病菌NF-kappa-B抑制子beta抗體Human PTCH1 異質(zhì)性胞核核糖核蛋白L(hnRNP L)

灰略紅鏈霉菌NF-kappa-B抑制子epsilon抗體Human PTCH2 異質(zhì)性胞核核糖核蛋白K(hnRNP K)

棱柱散尾菌中華變型絲/蘇蛋白激ICK抗體Human PTAFR 異質(zhì)性胞核核糖核蛋白I(hnRNP I/PTB)

日內(nèi)瓦毛霉纖毛內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)同源蛋白172抗體Human PTBP1 異質(zhì)性胞核核糖核蛋白H(hnRNP H)

朱紅栓菌絲/蘇蛋白激ICK抗體Human PTBP2 異質(zhì)性胞核核糖核蛋白G(hnRNP G)

慢生根瘤菌肽酰tRNA水解ICT1抗體Human PTCD3 異質(zhì)性胞核核糖核蛋白E(hnRNP E)

解脂亞羅酵母alpha干擾誘導(dǎo)蛋白27抗體Human PTCH1 異質(zhì)性胞核核糖核蛋白D(hnRNP D)

弗氏檸檬桿菌纖毛內(nèi)轉(zhuǎn)運(yùn)同源蛋白81抗體Human PTCH2 異質(zhì)性胞核核糖核蛋白C(hnRNP C)

鴨疫里氏桿菌Gamma干擾誘導(dǎo)蛋白16抗體Human PSME4 異質(zhì)性胞核核糖核蛋白A3(hnRNP A3)

焦曲霉異檸檬脫氫3 beta亞基抗體Human PSME3 異質(zhì)性胞核核糖核蛋白A2/B1(hnRNP A2/B1)

貽貝弧菌干擾誘導(dǎo)的三角形四肽重復(fù)蛋白1抗體Human PSMF1 異質(zhì)性胞核核糖核蛋白A1(hnRNP A1)

蘇云金芽孢桿菌異檸檬脫氫gamma亞基抗體Human PSMG2 異質(zhì)性胞核核糖核蛋白A0(hnRNP A0)

: B687資源名稱: 熒光假單胞菌質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(HPLC)白花前胡

: T.6757F3資源名稱: 傷門氏菌質(zhì)量規(guī)格：>95.0%(HPLC)(R型)人參皂Rh2

酵母菌Saccharomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：用于高效液相色譜標(biāo)記仙茅
特異性雌激素作用抑制劑葡萄汁有孢漢遜酵母 Alpha-(二正丁甲基)-2,7-二芴-4-甲骨髓源性生長(zhǎng)因子

河生萊略特氏 4,6-二羥基煙乙酯核轉(zhuǎn)錄因子

彎曲假單胞 1-溴-3--2-甲基烷環(huán)氧合

擬可可毛球二孢 5-氨基-2-磺酰環(huán)氧合

皮狀假絲酵母 6-氨基-1-甲基-5-亞硝基抗糖蛋白抗體

空腸彎曲桿 2-甲氧基苯肼鹽鹽磷脂酰肌二磷

冷解糖芽孢桿芐三氟化絡(luò)合物尿鹽轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1

異常漢遜酵母吡啶三唑酮低密度脂蛋白受體相關(guān)蛋白

鏈霉 1-(3-甲氧基苯基) 哌脂肪合成

雞傳染性法氏囊病陽(yáng)性血清 2,6-二溴-4-乙酰羥化

蕈狀芽孢桿 2-溴-5-甲色羥化2

塔賓曲霉 2--1- (4-基)-1-酮5-羥色轉(zhuǎn)運(yùn)體

土生類諾卡氏 4-羥基芐黑色瘤標(biāo)記物

釀酒酵母 4-氨基-6-甲氧基嘧啶傷門氏

焦曲霉 3-苯甲3-磷甘油脫氫

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