Unna堿性美藍(lán)染色液-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	FS-X9941

產(chǎn)品介紹:

用途：

軟骨染色，主要顯示透明軟骨

注意事項(xiàng)：

有碳酸鉀、美藍(lán)等組成。

儲存條件：室溫，避光，12個月

中文名稱：Unna堿性美藍(lán)染色液

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：100ml

貨號：FS-X9941

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

枯草芽孢桿菌鋅指蛋白851抗體Human FGFBP2 豚鼠膽囊收縮/腸促胰肽(CCK)免疫試劑盒

草分枝桿菌嗜乳脂蛋白2亞型A1抗體Human FKBP10 豚鼠脂(CHE)免疫試劑盒

線殼囊孢(座線孢)磷化c-fos抗體Human FKBP1A 豚鼠單核趨化蛋白4(MCP-4/CCL13)免疫試劑盒

百脈根中間根瘤菌磷化c-fos抗體Human FKBP14 豚鼠單核趨化蛋白1(MCP-1/CCL2/MCAF)免疫試劑盒

煙色齒耳磷化原癌基因c-Jun抗體Human FGFR1OP 豚鼠單氧化(MAO)免疫試劑盒

櫟金錢菌磷化原癌基因c-kit抗體Human FGFBP3 豚鼠催產(chǎn)(OT)免疫試劑盒

反硝化鹽單胞菌1號染色體開放閱讀框148抗體Human FNDC3A 豚鼠促腎上腺皮質(zhì)激(ACTH)免疫試劑盒

薄層菌屬性T抗原-4抗體Human FKBP1B 豚鼠促卵泡(FSH)免疫試劑盒

細(xì)鏈格孢鈣調(diào)調(diào)節(jié)蛋白相關(guān)蛋白抗體Human FN3KRP 豚鼠雌激(estrogen)免疫試劑盒

暗擬莖點(diǎn)霉（可訂購）緊密連接蛋白1抗體Human FNTA 豚鼠腸脂肪結(jié)合蛋白(iFABP)免疫試劑盒

產(chǎn)卟啉桿菌1號染色體開放閱讀框149抗體Human FNIP1(Folliculin-interacting protein 1) 豚鼠表皮生長因子(EGF)免疫試劑盒

產(chǎn)黑鏈霉菌磷化原癌基因c-kit抗體Human FLCN 豚鼠白三烯D4(LTD4)免疫試劑盒

針葉樹散斑殼磷化原癌基因c-kit抗體Human FLJ25006 豚鼠白三烯B4(LTB4)免疫試劑盒

球孢白僵菌磷化淋巴衍生C-型凝集抗體Human FLJ10357 豚鼠白介8(IL-8)免疫試劑盒

葡萄座腔菌2號染色體開放閱讀框39抗體Human FLI1 豚鼠白介6(IL-6)免疫試劑盒

稻生黃單胞菌2號染色體開放閱讀框49抗體Human FMN1 豚鼠白介5(IL-5)免疫試劑盒

根瘤菌Rhizobium│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRα1微球蛋白/bikunin前體試劑盒5-羥基馬鞭草

沙漠奇異球菌Deinococcus│deserti 質(zhì)量規(guī)格：>99%,BRα1性糖蛋白試劑盒去氧基醉椒

大腸埃希氏菌Escherichia│coli 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRα1抗胰糜蛋白試劑盒去氫駱駝蓬堿
Unna堿性美藍(lán)染色液朱黃籃狀 FMOC-D-1,2,3,4-四氫-Β-咔啉-3-羧β2巨球蛋白

Paenibacillus durus 2,3,7,8,12,13,17,18-八乙基-21H,23H-卟吩α-烯化

解脂假絲酵母 3-氨基-2,2-二甲基-1-(草鹽形式）α-烯化

加德納 8-苯基辛胸腺表達(dá)趨化因子

長蠕孢 N-(4-溴苯基)硫脲再生胰島衍生蛋白4

褐囊蜜環(huán) N-3-異惡唑叔丁酯p物質(zhì)前提

野土地桿 5-溴-2-呋喃甲酰肼EB病包膜糖蛋白gp350抗體

釀酒酵母 4-硝基馬尿MG29抗體

不產(chǎn)色鏈霉不產(chǎn)色亞種 4-氨基鄰甲組釋放因子

釀酒酵母 2-溴-1,3-二-5-氟苯磷化肝生長因子受體

噬果膠黃桿 3--1,2,3-三羧map2k5

地衣芽孢桿 3-氧雜環(huán)丁烷支原體IgG抗體

康寧木霉 3-二氟甲氧基衣原體抗體IgG

相思根瘤 4-甲氧基-2-乙肺炎支原體IgM抗體

膨端青霉 2,4-二羥基-3-硝基吡啶肌抗體

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