ROCK-I和ROCK-II抑制劑(Y-27632)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10325

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：ROCK-I和ROCK-II抑制劑(Y-27632)

英文名稱：Y-27632

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10325

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：Y-27632

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg

Y-27632是一種ATP競(jìng)爭(zhēng)性的ROCK-I和ROCK-II抑制劑，作用于ROCK-I和ROCK-II，Ki分別為220nM和300nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：146986-50-7

純度：99.65%

分子量：247.34

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

葡萄生擬莖點(diǎn)霉菌肌肉特異性環(huán)指蛋白3抗體Human NUP50 山梨脫氫(SDH)

芽孢桿菌屬磷化原癌基因c-Met相關(guān)酪激抗體Human NUP205 沙眼衣原體抗原(CT)

釀酒酵母絲裂原活化蛋白激13抗體Human NUDT6 沙眼衣原體抗體(CT)

釀酒酵母多纖毛蛋白抗體Human NUP53 沙眼衣原體蛋白樣活性因子(CPAF)

枯草芽孢桿菌肌管相關(guān)蛋白8抗體Human NUMBL 沙眼衣原體(CT)

吉氏芽孢桿菌巨噬甘露糖受體2抗體Human PYGB(Glycogen phosphorylase, brain form) 沙漠猬因子(DHH)

不動(dòng)桿菌周期G1的相互作用蛋白抗體Human NUDT8 殺傷凝集樣受體(KLR)

芽胞桿菌主導(dǎo)控制樣蛋白3抗體Human NUP107 殺傷免疫球蛋白樣受體(KIR)

枯草芽孢桿菌斯氏亞種絲裂原活化蛋白激MKK3抗體Human NUP133 殺菌性/通透性增加蛋白(BPI)

脫葉鏈霉菌MYSM1抗體Human NUP160 殺菌肽B(CecB)

新月彎孢單羧轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白-1抗體Human F11(Coagulation factor XI) 殺菌肽(cecropin)

巴斯德畢赤酵母微管相關(guān)蛋白1A抗體Human NUP153 色上皮衍生因子(PEDF)

漢遜德巴利酵母中期因子/肝結(jié)合生長(zhǎng)因子抗體Human NUP50 色酰tRNA合成(WARS)

曲霉鹽皮質(zhì)激受體抗體Human NUP205 色羥化(TPH)

類馬鏈球菌促黑激α抗體Human NUDT6 三角形四肽重復(fù)蛋白1(TTC1/TPR1)

桃中田殼小圓孢菌Myc基因相關(guān)X因子抗體Human NUP53 狀腺原(T3)

ATCC53103資源名稱: 鼠李糖乳桿菌質(zhì)量規(guī)格：螯合劑五味子乙

鏈霉菌Streptomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：螯合劑五味子酯

銅綠假單胞菌Pseudomonas│aeruginosa 質(zhì)量規(guī)格：>98.0%(T)五味子酯乙
ROCK-I和ROCK-II抑制劑(Y-27632)固氮離子交換樹(shù)酯，1×4β干擾

黃赭色鏈霉噻吩-2-甲亞銅β-內(nèi)啡肽

雙孢蘑菇香葉基酮β葡萄糖

鹿角芝 3,6,9,12-Tetraoxatetradecane-1,14-diamineβ-神經(jīng)生長(zhǎng)因子

黃青霉脫氧核糖核鈉鹽β位淀粉樣前體蛋白裂解1

腐皮殼 4-(羥基)苯氧基乙β血小板球蛋白;β血栓環(huán)蛋白

副豬嗜血桿 1-氨基-1-環(huán)烷羧鹽鹽γ氨基丁

多帶革孔 L-氨酰甘γ氨基丁A型受體

卡爾斯伯酵母 (1R,2R)-(-)-N,N'-二甲基環(huán)己烷-1,2-二γ-氨基丁受體

隆紋黑蛋巢 2-甲基啉γ干擾

葡萄球?qū)?/span> 2,4-二苯γ干擾誘導(dǎo)單核因子

糞腸球四乙基化，一水γ谷氨酰轉(zhuǎn)肽

勝利油田鹽單胞乙炔鋰乙二復(fù)合物γ谷氨酰轉(zhuǎn)移

脊孢糖多孢 (二乙基)膦δ 氨基酮戊

毛栓布枯油δ氨基乙酰脫水
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)