當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>核酸檢測試劑盒>>熒光PCR法>> 50T狐種特異性基因核酸檢測試劑盒
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
產(chǎn)品名稱 | 分類 | 貨號 |
狐種特異性基因核酸檢測試劑盒 | 熒光PCR法 | FS-P10234 |
PCR技術(shù)的定量原理:?
擴(kuò)增曲線
在Real-time qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于液中。
實(shí)時熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
PCR檢測試劑盒:
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中,按100g:3ml的比例加入Trizol試劑,嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol(按3ml/100mg組織,寧多勿少)置于玻璃勻漿器中勻漿后,冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中,4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中,室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol,振蕩15s,室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相,移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol,振搖,置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min,EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清,紙巾吸干,加入75%乙醇1ml,振搖,充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇,空氣干燥10min(可離心加快干燥,盡量吸盡離心液體)。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中(可吹打混勻),-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度,所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳,顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
IFFI06005培養(yǎng)基: 728模式菌株: no種屬: Lactobacillus│acidophilus提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 37℃ 真空冷凍干燥法
土地戈登氏菌生長條件: 28-30℃培養(yǎng)基: 794提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法
-155℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
腐皮鐮孢生長條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no
ATCC27562=DSM10143=NBRC15645=JCM3725=BCRC12905=CCRC12905=CECT529=CCUG13448模式菌株模式菌株: yes種屬: Vibriovulnificus人的血液,佛羅里達(dá),美國安全等級: 1培養(yǎng)基: 97生長條件: 37℃
短芽孢桿菌培養(yǎng)基: 831模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 37℃ 真空冷凍干燥法
棒形孢擬盤多毛孢培養(yǎng)基: 0014模式菌株: no海蓮枝(內(nèi)生)提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1生長條件: 25-28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;礦物油法
玫瑰絳紅小單孢菌產(chǎn)生rosamicin(薔薇霉素)模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0012生長條件: 35-37C
假交替單胞菌培養(yǎng)基: 821極地細(xì)菌 產(chǎn)酶微生物/蛋白酶、脂酶(三丁甘油酯)沉積物/深灰色沉積物提供形式: 凍干物模式菌株: no生長條件: 15℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
-156℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
小單孢菌屬抗細(xì)菌;抗金黃色葡萄球菌;抗枯草芽孢桿菌;活性物質(zhì);能抑制鏈霉菌93-L5產(chǎn)生黑色素。模式菌株: no湖底泥提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0012生長條件: 35-37C
腐皮鐮孢生長條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no
伊尼奧小單孢菌澄江變種培養(yǎng)基: CM0012產(chǎn)生Sisomicin(西梭米星)提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 35-37C 真空冷凍干燥
卷曲乳桿菌培養(yǎng)基: CM0006模式菌株: no健康孕婦分泌物提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 37℃ -80℃冰箱凍結(jié)法
鏈霉菌培養(yǎng)基: 12模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 28℃ 真空冷凍干燥法
竹瘤座菌培養(yǎng)基: 66模式菌株: no竹叢枝頂端葉鞘提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1生長條件: 25-28 定期移植法
Trypticase-Soy-PolymyxinBrothBase
m-TEC瓊脂 m-TEC Agar 水中耐熱細(xì)菌濾膜計數(shù)
麥康凱瓊脂 Maconkey Agar 250 腸道致病菌的選擇性分離、培養(yǎng)(OXOID方法)
玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基250g/瓶霉菌、酵母菌計數(shù)incubationmedia玫瑰紅鈉瓊脂培養(yǎng)基250g/瓶霉菌、酵母菌計數(shù)
改良麥康凱肉湯添加劑 1ml*5支 每支添加于200mlHB8659中
WS瓊脂 Wuhan Salmonella Agar 250克 分離沙門氏菌和志賀氏菌用
Honda氏產(chǎn)肉湯基礎(chǔ) Honda Toxin-Producing Base 250克 致瀉大腸艾希氏產(chǎn)培養(yǎng)
Elek氏培養(yǎng)基 Elek Medium 250克 致瀉大腸艾希氏菌素測定用
Rustigian氏尿素肉湯 Rustigian Urea Broth 100克 細(xì)菌尿素酶試驗(yàn)
狐種特異性基因核酸檢測試劑盒營養(yǎng)瓊脂斜面規(guī)格:250g用途:用于細(xì)菌的純化培養(yǎng)
改良Skirrow氏肉湯規(guī)格:FBP溶液用途:1ml每支含量
改良Skirrow瓊脂添加劑規(guī)格:1ml*5支用途:每支添加于100ml改良Skirrow氏肉湯中
改良BPLS瓊脂規(guī)格:250g用途:用于各種標(biāo)本中沙門氏菌選擇性分離培養(yǎng)(ISO標(biāo)準(zhǔn))
乳菌/雙歧桿菌顯色培養(yǎng)基規(guī)格:1000ml用途:用于乳菌/雙歧桿菌的顯色培養(yǎng)
Bolton肉湯規(guī)格:250g用途:用于空腸彎曲菌的增菌(GB標(biāo)準(zhǔn))
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