PCR的反應(yīng)條件：
因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小，設(shè)定25～30個(gè)循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴(kuò)增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會(huì)出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預(yù)備實(shí)驗(yàn)可2℃間隔進(jìn)行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時(shí)，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時(shí), 時(shí)間設(shè)定可稍長(zhǎng)一些。通常，Anneal溫度太高，有時(shí)會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時(shí)，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時(shí)間太短時(shí)，會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物或者會(huì)有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時(shí)間太長(zhǎng)時(shí)，會(huì)出現(xiàn)Smear。
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參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：貂種特異性基因核酸檢測(cè)試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品貨號(hào)：FS-P10233
產(chǎn)品分類：熒光PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸：低溫運(yùn)輸
儲(chǔ)存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸：低溫、避光，快遞免費(fèi)送貨上門。
產(chǎn)品特點(diǎn)：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開(kāi)發(fā)的高靈敏 PCR檢測(cè)試劑盒 。
實(shí)驗(yàn)過(guò)程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無(wú)到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o(wú)菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無(wú)熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃長(zhǎng)期保存。
4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測(cè)。
定量PCR方法：
a、競(jìng)爭(zhēng)法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競(jìng)爭(zhēng)性模板。在同一反應(yīng)管中，待測(cè)樣品與競(jìng)爭(zhēng)模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增（其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記）。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競(jìng)爭(zhēng)性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段，而待測(cè)模板不被酶切，可通過(guò)電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開(kāi)，分別測(cè)定熒光強(qiáng)度，根據(jù)已知模板推測(cè)未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí)，內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長(zhǎng)度不同，二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開(kāi)來(lái)，分別測(cè)定其熒光強(qiáng)度，以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測(cè)模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物，擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體－辣根過(guò)氧化物酶結(jié)合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn)，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可實(shí)現(xiàn)定量檢測(cè)目的。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR：
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測(cè)的局限，實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測(cè)一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度，并記錄在電腦軟件之中，通過(guò)對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR無(wú)需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí)，剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期（對(duì)數(shù)期），此時(shí)微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測(cè)定，因此，實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確，重現(xiàn)性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測(cè)等諸多領(lǐng)域。
 JCM13192=CIP109020=KCTC22434=NBRC101534=NRRLB-41137模式菌株模式菌株: yes種屬: Gramellaportivictoriae香港維多利亞港的沉積物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 102生長(zhǎng)條件: 30℃

 3alvar.2B.3339噬菌體分型用 3a1 var.2　　　1,4,5　b　1,2模式菌株: no種屬: Salmonella│paratyphi B提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2培養(yǎng)基: CM0051生長(zhǎng)條件: 37℃

繩索狀芽孢桿菌分類、研究，可以用來(lái)生物肥料。模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 0065生長(zhǎng)條件: 28℃

黏著海桿菌培養(yǎng)基: 471南大西洋細(xì)菌沉積物/TVMC沉積物(9-12cm)提供形式: 凍干物模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 25℃ 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

 -153℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

葡萄座腔菌生長(zhǎng)條件: 25培養(yǎng)基: 14蘋果枝干提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no 定期移植法

蘇云金芽孢桿菌加拿大亞種培養(yǎng)基: 2模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 30 真空冷凍干燥法；定期移植法

蘇云金芽孢桿菌生物殺蟲劑模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物；凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 2生長(zhǎng)條件: 30℃

橘橙鏈霉菌土壤微生物資源調(diào)查及分類學(xué)研究模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 39生長(zhǎng)條件: 28℃

銅綠假單胞菌生長(zhǎng)條件: 36℃模式菌株: no痰提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2 -80℃冰箱凍結(jié)法

枝芽胞桿菌培養(yǎng)基: 821微生物/耐鹽菌（可耐受鹽濃度為96‰）沉積物/紅海沉積物提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 22℃ 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

 -154℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

大球蓋菇生長(zhǎng)條件: 25培養(yǎng)基: 14提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no 定期移植法

枯草芽孢桿菌生長(zhǎng)條件: 35-37℃培養(yǎng)基: CM0003提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法

菲羅茄畢赤氏酵母培養(yǎng)基: 53模式菌株: no芒果提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 30℃ -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;其他

近平滑假絲酵母近海酵母模式菌株: no生物樣/白骨壤/葉提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 513生長(zhǎng)條件: 28℃

WortAgar

m-TGE肉湯 250(g) incubation media m-TGE肉湯 250(g)

山梨醇麥康凱瓊脂平板 Sorbitol Maconkey Agar Plate 10塊

卵黃瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)250肉梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌的分離培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn))incubationmedia卵黃瓊脂培養(yǎng)基基礎(chǔ)250肉梭菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌的分離培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn))

副溶血性弧菌瓊脂 250g 副溶血性弧菌的選擇性分離培養(yǎng)

SC增菌液  Selenite Cystine Broth  250克  沙門氏菌選擇性增菌培養(yǎng)

SE增菌液  Selenite Enrichment Medium  250克  增殖標(biāo)本中的沙門氏菌

亮綠瓊脂  Brilltant Green Agar  250克  沙門氏菌分離培養(yǎng)

亮綠增菌液  Brilltant Green Enrichment Broth  250克  蛋與蛋制品中沙門氏菌檢驗(yàn)
貂種特異性基因核酸檢測(cè)試劑盒副溶血性弧菌瓊脂規(guī)格：250g用途：用于副溶血性弧菌的選擇性分離培養(yǎng)

化十六基三瓊脂培養(yǎng)基規(guī)格：250g用途：用于綠膿桿菌的選擇性分離培養(yǎng)

3%化鈉胰蛋白胨大豆瓊脂規(guī)格：250g用途：用于副溶血性弧菌純化培養(yǎng)（GB標(biāo)準(zhǔn)）

Kovacs氏靛基質(zhì)試劑盒規(guī)格：5ml*2用途：用于吲哚（靛基質(zhì)）試驗(yàn)

硫新霉素規(guī)格：100ug*5用途：添加于HB0304-2中

L型細(xì)菌高滲鹽增菌培養(yǎng)基規(guī)格：250g用途：用于L型細(xì)菌增菌培養(yǎng)