酸性固綠染色液-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X9937

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：酸性固綠染色液

英文名稱：

產(chǎn)品規(guī)格：2×50ml

貨號(hào)：FS-X9937

產(chǎn)品介紹:

用途：

顯示細(xì)胞中堿性蛋白，尤其是組蛋白

儲(chǔ)存條件：室溫，避光，12個(gè)月

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

陰溝腸桿菌腦蛋白44樣蛋白抗體Human FYTTD1 小鼠3-硝基酪(3-NT)免疫試劑盒

埋藏曲霉嗜乳脂蛋白樣2抗體Human FXYD4 小鼠3-α羥基類固脫氫(Akr1c9)免疫試劑盒

異常漢遜酵母嗜乳脂蛋白樣8抗體Human FXYD6 小鼠3-O-甲基多巴(3-OMD)免疫試劑盒

泛枝芽孢桿菌嗜乳脂蛋白樣9抗體Human FXYD7 小鼠Ⅱ型膠原螺旋肽(HELIX-Ⅱ)免疫試劑盒

野蘑菇BTB/POZ結(jié)構(gòu)域蛋白7抗體Human FUT10 小鼠Ⅱ型膠原C端肽(CTX-Ⅱ)免疫試劑盒

多根硬皮馬勃腦特異性血管生成抑制蛋白1抗體Human FYTTD1 小鼠Ⅱ型膠原(Col Ⅱ)免疫試劑盒

相思根瘤菌Bcl2相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子抗體Human FUT4 小鼠25羥基維生D3(25 HVD3)免疫試劑盒

乳桿菌屬腦環(huán)核門控通道蛋白1抗體Human FUT7 小鼠25羥基膽固(25-OHC)免疫試劑盒

枯草芽胞桿菌癌易感基因復(fù)合蛋白4抗體Human FUT11 小鼠20S蛋白體(20SP)免疫試劑盒

豬輪狀病紡錘體檢查點(diǎn)蛋白抗體Human FUT8 小鼠Ⅰ型前膠原羧基端肽(PⅠCP)免疫試劑盒

谷棒桿菌有絲分裂檢驗(yàn)點(diǎn)蛋白BubR1抗體Human FUCA2 小鼠Ⅰ型前膠原N端前肽(PⅠNP)免疫試劑盒

釀酒酵母癌相關(guān)蛋白3抗體Human FUK 小鼠Ⅰ型膠原N末端肽(NTX)免疫試劑盒

傘枝犁頭霉癌相關(guān)蛋白2抗體Human FUT9 小鼠Ⅰ型膠原C端肽(CTX-Ⅰ)免疫試劑盒

灰褐鏈霉菌癌抗雌激耐藥蛋白1Human Fukutin 小鼠Ⅰ型膠原(Col Ⅰ) 免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌胞漿支鏈基轉(zhuǎn)抗體Human FUSIP1 小鼠17-類固(17-KS)免疫試劑盒

線團(tuán)擬諾卡氏菌磷化癌抗雌激耐藥蛋白1抗體Human FUT10 小鼠17羥孕(17-OHP)免疫試劑盒

塔圖姆氏菌屬Tatumella│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRα-輔肌動(dòng)蛋白3試劑盒5-羥基-6,7-二氧基黃

假單胞菌Pseudomonas│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>98%,BRα-輔肌動(dòng)蛋白1試劑盒5-羥基-7,8-二氧基黃

諾卡氏菌Nocardia│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>95%，BRα-防御4試劑盒去氫荷包牡丹堿
酸性固綠染色液球形芽孢桿葉綠銅鈉鹽戊型肝炎病抗原

地中海擬無枝沙美特羅類白抗原B27

熱帶假絲酵母苯基-β-D-吡喃半乳糖補(bǔ)體因子P

出芽短梗霉 5-氨基異酞單甲酯絲肽抑制因子Kazal型4

空腸彎曲桿芐基苯基碳酯色P4503A4

佛雷德里克斯堡假單胞 2-氨基-6-溴乙型腦炎病IgG抗體

Aurantimonas coralicida 2,6,7-三-3-三氟甲基喹喔啉維甲誘導(dǎo)基因1蛋白

疏水戈登氏 N-異基-4甲類固硫酯

熒光假單胞 9-雙環(huán)[3.3.1]壬烷磺基轉(zhuǎn)移

濟(jì)州單胞鄰芐基苯3β羥基5類固脫氫

黑根霉 9-溴-1-壬烯膽固7α羥化

谷棒桿 2-溴-6-羥基吡啶類固17α單加氧

蠟狀芽孢桿 4-(2,2,2-三氟乙氧基)類固異構(gòu)

油菜核病 4-氨基-2--3-硝基吡啶皮質(zhì)類固11β脫氫同工1

施氏假單胞 L-乳鋰皮質(zhì)類固11β脫氫同工2
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)