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貨號	FS-X10627

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑(Daun02)

英文名稱：Daun02

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg

貨號：FS-X10627

產(chǎn)品介紹:

Daun02經(jīng)過β半乳糖苷酶β-galactosidase催化反應(yīng)生成Daunorubicin，Daunorubicin是拓?fù)洚悩?gòu)酶(topoisomerase)抑制劑。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：290304-24-4

純度：98.56%

分子量：884.79

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

半軟干酪居真菌細(xì)菌PE-CY5標(biāo)記的羊抗雞IgGAnti-SP1 Antibody古梅斯蛋白1(AMZ1)

大腸埃希氏桿菌APC標(biāo)記的羊抗雞IgGAnti-SP4 Antibody孤啡肽(OFQ)

灰黃青霉Alexa Fluor 350標(biāo)記的羊抗雞IgGAnti-SP4 Antibody孤菲肽原(PNOC)

枯草芽孢桿菌羅丹明標(biāo)記的羊抗雞IgGAnti-SP6 Antibody孤菲肽受體(NOCIR)

雞油菌膠體金標(biāo)記的羊抗雞IgGAnti-SP5 Antibody孤兒磷2(PHOSPHO2)

冠突曲霉FITC標(biāo)記的羊抗雞IgGAnti-SPARC Antibody孤兒磷1(PHOSPHO1)

環(huán)狀芽孢桿菌堿性磷（AP）標(biāo)記的羊抗雞IgGAnti-SPARCL1 Antibody根蛋白(RDX)

葡萄座腔菌辣根過氧化物標(biāo)記的羊抗雞IgGAnti-SPARC Antibody陰離子轉(zhuǎn)運蛋白1(TAT1)

多粘類芽孢桿菌堿性磷（AP）標(biāo)記的羊抗人IgGAnti-SPARC Antibody受體4(TR4)

蘇云金芽孢桿菌羅丹明標(biāo)記的羊抗人IgGAnti-SPARC Antibody受體2(TR2)

枯草芽孢桿菌Cy7標(biāo)記的羊抗人IgGAnti-SPARCL1 Antibody睪(Testosterone)

果生鏈核盤菌PE標(biāo)記的羊抗人IgGAnti-SPHK1 Antibody睪3(TIC3)

枯草芽孢桿菌生物標(biāo)記的羊抗人IgGAnti-SPCS1 Antibody睪2(TIC2)

放線纖維菌Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗人IgGAnti-SPHK2 Antibody睪1(TIC1)

球形芽孢桿菌Alexa Fluor 647標(biāo)記的羊抗人IgGAnti-SPHK2 Antibody高鐵血紅蛋白還原(MHBR)

孔雀石褐鏈霉菌PE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗人IgGAnti-SPP1 Antibody高遷移率族核小體結(jié)合域蛋白1(HMGN1)

核有絲分裂器NuMA蛋白抗體膠凍樣類芽孢桿菌大鼠神經(jīng)星形膠質(zhì)細(xì)胞提取物

抑癌基因NDRG2抗體乳酒假絲酵母大鼠嗅鞘細(xì)胞提取物

DNA損傷關(guān)卡蛋白1抗體擴(kuò)展青霉大鼠神經(jīng)元細(xì)胞提取物

神經(jīng)細(xì)胞發(fā)育相關(guān)調(diào)控蛋白抗體雜色曲霉原變種大鼠小腦顆粒細(xì)胞提取物
拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑(Daun02)球孢白僵 Fmoc-3-(2-萘基)-L-β-防御

平滑針層孔芥β-羥基丁

鮑氏志賀氏（現(xiàn)1） L-古洛糖-γ-內(nèi)酯γ干擾

西提亞橄欖形 1-乙基萘白介1β

托姆青霉 8-羥基喹啉-N-氧化物白介1受體拮抗劑

鏈格孢三乙二乙白介2

Rhodobacter johrii 10-十一烯白介4

牛鏈球十一白介6

根瘤 10-十一烯表皮生長因子

水棲黃桿 4-硝基吡啶-N-氧化物層粘連蛋白

白乳菇十一超氧化物歧化

梅林青霉十一觸珠蛋白相關(guān)蛋白

微小桿 1-丁基-4-甲基化吡啶鎓雌二

克魯斯假絲酵母 2-溴-5-氟芐溴促黃體

英諾克李斯特氏 5－氨基苯并噻唑促卵泡
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞，細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)