當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> Akt廣譜抑制劑(Afuresertib)
貨號(hào) | FS-X10533 |
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英文名稱:Afuresertib
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10533
產(chǎn)品介紹:
Afuresertib是一種有效的ATP競爭性的Akt廣譜抑制劑,作用于AKT1,AKT2和AKT3,Ki分別為0.08,2和2.6nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1047644-62-1 別名:GSK2110183 純度:98.91% 分子量:427.32 儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存于氮?dú)庵小?/span> |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
紅曲霉特異蛋白抗體Anti-KCNA2 Antibody雙特異性磷1(DUSP1)
反卷毛殼THAP2蛋白抗體Anti-KCNA1 Antibody雙特異性酪磷化調(diào)節(jié)激1A(DYRK1A)
云芝栓孔菌瞬時(shí)受體電位離子通道蛋白5抗體(M亞家族)Anti-KCNA1 Antibody雙糖鏈蛋白聚糖(BGN)
黑木耳云章氏酵母瞬時(shí)受體電位離子通道蛋白4抗體(M亞家族)Anti-KCNA3 Antibody雙腎上腺皮質(zhì)激樣激1(DCLK1)
芽胞桿菌屬形成相關(guān)凋亡蛋白2抗體Anti-KCNA4 Antibody雙腎上腺皮質(zhì)激(DCX)
鞘桿菌轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1抗體Anti-KCNA5 Antibody雙解絲蛋白2(TWF2)
瘤突曲霉核凋亡因子THAP1抗體Anti-KCNA5 Antibody雙解絲蛋白1(TWF1)
卷枝毛霉顆粒相關(guān)蛋白TIA-1抗體Anti-KCNB1 Antibody(PB0149)衰老關(guān)鍵蛋白5(FBLN5)
糞腸球菌胸腺核蛋白1抗體Anti-KCNA6 Antibody衰老關(guān)鍵蛋白4(FBLN4)
褐囊蜜環(huán)菌腫瘤壞死因子α誘導(dǎo)相互作用蛋白3抗體Anti-KCND1 Antibody衰老關(guān)鍵蛋白3(FBLN3)
蘇云金芽孢桿菌景洪亞種辣椒受體3抗體Anti-KCNH1 Antibody衰老關(guān)鍵蛋白2(FBLN2)
蛹蟲草(北冬蟲夏草,北蟲草)TEX261蛋白抗體Anti-KCND2 Antibody衰老關(guān)鍵蛋白1(FBLN1)
亞褐鈸孔菌促甲狀腺受體抗體Anti-KCND3 Antibody衰變加速因子(DAF)
三線鐮孢磷化酪激A抗體Anti-KCNH1 Antibody輸入蛋白9(IPO9)
阿姆斯特丹曲霉Toll樣受體3抗體Anti-KCNIP2 Antibody輸入蛋白8(IPO8)
RP4質(zhì)粒T受體γ抗體Anti-KCNH2 Antibody輸入蛋白7(IPO7)
突觸結(jié)合蛋白12抗體腸炎沙門氏菌亞種大鼠成骨細(xì)胞
突觸結(jié)合蛋白10抗體葡萄汁有孢漢遜酵母大鼠骨骼肌衛(wèi)星細(xì)胞
14-3-3蛋白抗體高地芽胞桿菌大鼠滑膜細(xì)胞
角質(zhì)蛋白α抗體大腸埃希氏菌(凍干粉)大鼠關(guān)節(jié)軟骨細(xì)胞
Akt廣譜抑制劑(Afuresertib)盤長孢狀盤孢 1-芐基-3-氨基吡咯烷球蛋白E
雞腿菇2 3-氨基-1-Boc-球蛋白G
鏈格孢 (1S,2S,5S)-(-)-2-羥基-3-蒎酮球蛋白G1
淡青鏈霉 三(4-氟苯基)膦球蛋白G2
陰溝腸桿 4-氨基-2-球蛋白M
蘇云金芽孢桿 2-羥基-4-正辛氧基二苯甲酮腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子
巨獸芽孢桿 腺-5'-磷牛血清白蛋白
白布勒酵母 4-(芐氧基羰基)苯皮質(zhì)
多粘類芽孢桿 2-腺皮質(zhì)酮;腎上腺酮
新疆鹽地桿屬 乙基六氟戊二?;吇蜃优潴w2
葡萄球 5-溴-2-熱休克蛋白60
假單胞屬 2--5-熱休克蛋白-70
弗雷克氏志賀氏 N-Boc-4-氨基-4-羧熱休克蛋白90
球毛殼 N-叔丁氧羰基4-(FMOC-氨基)-4-羧溶
圍小叢殼 α-代肉桂溶
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