PCR的反應(yīng)條件：
因擴增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小，設(shè)定25～30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少，擴增量不足；如果循環(huán)次數(shù)太多，則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45～68℃之間 (預(yù)備實驗可2℃間隔進行)。另外，由于在60～68℃間，也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時，每kbp大體可設(shè)定30秒～1分鐘；當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時, 時間設(shè)定可稍長一些。通常，Anneal溫度太高，有時會得不到擴增產(chǎn)物；Anneal溫度太低時，容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外，Extension時間太短時，會得不到擴增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成；而Extension時間太長時，會出現(xiàn)Smear。
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參數(shù)規(guī)格：
產(chǎn)品名稱：鴨種特異性基因核酸檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50T
產(chǎn)品貨號：FS-P10226
產(chǎn)品分類：熒光PCR法
產(chǎn)品運輸：低溫運輸
儲存條件：-20℃避光保存，避免反復(fù)凍融。
運輸：低溫、避光，快遞免費送貨上門。
產(chǎn)品特點：
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
實驗過程：
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2．對應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此，擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步驟 
1．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）    1 μl
加ddH2O至               50 μl
視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。
2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進入循環(huán)擴增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。
3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4．PCR的電泳檢測：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-10μl電泳檢測。
定量PCR方法：
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中，待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增（其中一個引物為熒光標(biāo)記）。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物，競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段，而待測模板不被酶切，可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開，分別測定熒光強度，根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物，內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記，下游引物不標(biāo)記。在模板擴增的同時，內(nèi)標(biāo)也被擴增。在PCR產(chǎn)物中，由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同，二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來，分別測定其熒光強度，以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。
c、PCR－ELISA法
利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物，擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合，再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體－辣根過氧化物酶結(jié)合物，最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR－ELISA法只是定性實驗，若加入內(nèi)標(biāo)，作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，也可實現(xiàn)定量檢測目的。
實時熒光定量PCR：
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此，實時熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個基礎(chǔ)之上的：
1）Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時，剛剛進入真正的指數(shù)擴增期（對數(shù)期），此時微小誤差尚未放大，因此Ct值的重現(xiàn)性，即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增，得到的Ct值是恒定的。
2）Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系，可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進行定量測定，因此，實時熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確，重現(xiàn)性*定量方法，已得到的*，廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究，藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
無乳鏈球菌 蘭氏B群研究模式菌株: no病料提供形式: 凍干物安全等級: 2培養(yǎng)基: 396生長條件: 37

條紋擬盤多毛孢植物病原菌模式菌株: no散尾葵提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25-28℃

韓國假單胞菌大洋細菌模式菌株: no沉積物/深海沉積物提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 471生長條件: 28℃

AS3.852產(chǎn)糖化酶。模式菌株: no種屬: Rhizopus│japonicus提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0014生長條件: 28℃

淡紫擬青霉生長條件: 25培養(yǎng)基: 14提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no 定期移植法

蘇云金芽孢桿菌生長條件: 30℃培養(yǎng)基: 0002提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

 -135℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

假諾卡氏菌培養(yǎng)基: 14模式菌株: no水中底泥提供形式: 斜面培養(yǎng)物；凍干物安全等級: 1生長條件: 25℃ -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法；礦物油法

毛柄金錢菌(金針菇)培養(yǎng)基: 0017食用菌提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 25℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

微桿菌1.海洋石油污染生物修復(fù); 2.生物活性物質(zhì)篩選模式菌株: no沉積物/珊瑚砂顆粒提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 821生長條件: 25℃

YIM61420模式菌株: no安全等級: 1種屬: Streptomyces│sp.植物提供形式: 凍干物培養(yǎng)基: 0038生長條件: 28℃

展青霉培養(yǎng)基: CM0017產(chǎn)生Griseofulvin灰黃霉素提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28C 真空冷凍干燥

大腸埃希菌科研及血清定型模式菌株: no病料提供形式: 凍干物安全等級: 2培養(yǎng)基: 335生長條件: 37

 -136℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

紅曲霉發(fā)酵，教學(xué) 紅曲菌(Monascus spp．)是我國重要的微生物資源，在我國已有上千年的使用歷史，被廣泛用于食品發(fā)酵劑、食品著色劑和中藥配伍的。由于紅曲菌在發(fā)酵過程中能產(chǎn)生多種具有活性的代謝產(chǎn)物：如紅曲色素、Monacolin類物質(zhì)、γ-氨基丁以及多種酶類模式菌株: no紅曲米提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 14生長條件: 28℃

水生黃桿菌生長條件: 20℃培養(yǎng)基: 848土壤提供形式: 凍干物模式菌株: no 真空冷凍干燥法

無機鹽瓊脂培養(yǎng)基250g紡織品防霉性能測試

MUGal(4-甲基傘形酮-β-半乳糖苷)肉湯基礎(chǔ) 100(g) incubation media MUGal(4-甲基傘形酮-β-半乳糖苷)肉湯基礎(chǔ) 100(g)

大腸桿菌&大腸菌群顯色培養(yǎng)基 E.Coli&Coliform Chromogenic Medium 1升 同時檢測大腸菌群和大腸桿菌，培養(yǎng)24小時，大腸桿菌顯紫色，大腸菌群顯紅色

改良MC培養(yǎng)基250incubationmedia改良MC培養(yǎng)基250

營養(yǎng)瓊脂 250g 霍亂弧菌傳代培養(yǎng)或純化培養(yǎng)

YM肉湯  YM Broth  250克  BR

土霉素葡萄糖酵母粉瓊脂基礎(chǔ)  OGY Agar  250克  霉菌、酵母菌分離培養(yǎng)和計數(shù)

華倫斯坦實驗室營養(yǎng)瓊脂  WL Nutrient Agar  250克  啤酒和發(fā)酵產(chǎn)品中酵母菌和細菌的計數(shù)

沙氏腦心浸液瓊脂  Sabouraud BHI Agar  250克  真菌檢測
鴨種特異性基因核酸檢測試劑盒1%NaCl甘露醇規(guī)格：20支詳情介紹

三糖鐵管規(guī)格：5ml*20支/包用途：用于腸桿菌科細菌的生化反應(yīng)篩選

T1N3 肉湯規(guī)格：250g用途：用于霍亂弧菌的生長試驗（SN標(biāo)準(zhǔn)）

CDC厭氧菌瓊脂規(guī)格：250g用途：用于厭氧菌分離培養(yǎng)，使用時需添加羊血、化血紅素和維生素K1

抗生素檢定培養(yǎng)基1號（PH6.5-6.7）規(guī)格：250g用途：用于藥品抗生素效價測定

TSA表面接觸皿（6.5cm）規(guī)格：10個/包用途：用于環(huán)境、器皿、設(shè)備和表面的無菌檢測