當(dāng)前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>核酸檢測試劑盒>>熒光PCR法>> 50T羊種特異性基因核酸檢測試劑盒
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 分類 | 貨號 |
羊種特異性基因核酸檢測試劑盒 | 熒光PCR法 | FS-P10224 |
特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
PCR技術(shù)的定量原理:
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擴增曲線
在Real-time qPCR中,對整個PCR反應(yīng)擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于液中。
實時熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
多頭節(jié)叢孢生長條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 18提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no -80℃冰箱凍結(jié)法;礦物油法;定期移植法
-132℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
空腸彎曲桿菌科研教學(xué)模式菌株: no雞泄殖腔提供形式: 凍結(jié)物安全等級: 2培養(yǎng)基: 0生長條件: 42
新型隱球酵母生長條件: 28℃培養(yǎng)基: 206提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 2模式菌株: no -80℃冰箱凍結(jié)法
小單孢菌屬抗細菌;抗枯草芽孢桿菌;抗金黃色葡萄球菌;抗瘧疾模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0012生長條件: 35-37C
地衣芽孢桿菌生長條件: 30℃培養(yǎng)基: 598提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法
鏈狀假絲酵母近海酵母模式菌株: no生物樣/海漆/根泥提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 513生長條件: 28℃
里拉微球菌飼料用植酶等的篩選模式菌株: no草魚腸胃道提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 0002生長條件: 37℃
-133℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
小單孢菌屬抗細菌;抗金黃色葡萄球菌;抗枯草芽孢桿菌;抗真菌;抗黑曲霉;抗瘧疾模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0012生長條件: 35-37C
白靈側(cè)耳(白靈菇)培養(yǎng)基: CM0017用于食用菌。提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 25℃ 礦物油法
季也蒙畢赤酵母培養(yǎng)基: 821生物活性物質(zhì)篩選沉積物/褐黑色沉積物上覆水提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no生長條件: 25℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
pTargetF模式菌株: 未知
AS3.951產(chǎn)蛋白酶模式菌株: no種屬: Aspergillus│oryzae提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0014生長條件: 25~28℃
75-049吸收及檢定霍亂診斷血清用 非O1模式菌株: no種屬: Vibrio│cholerae non-O1提供形式: 凍干物安全等級: 3培養(yǎng)基: CM0116生長條件: 37℃
-134℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
抗生素檢定培養(yǎng)基6.5-6.7)250g藥品抗生素效價測定
MUG培養(yǎng)基 100(g) incubation media MUG培養(yǎng)基 100(g)
EC-MUG培養(yǎng)基 100g 多管發(fā)酵法測定生活飲用水及其水源水中的大腸埃希氏菌(GB/T5750.12-2006)。
玫瑰紅鈉瓊脂RoseBengalMedium霉菌、酵母菌計數(shù)
SulfiteIronAgar
BiGGY瓊脂 BiGGY Agar 250克 念珠菌的分離培養(yǎng)
硝胺孟加拉紅瓊脂 DRBC Agar 250克 食品中霉菌及酵母菌的分離培養(yǎng)
WORT瓊脂 WORT Agar 250克 真菌,特別是酵母菌的計數(shù)和增菌培養(yǎng)
WORT肉湯 WORT Broth 250克 真菌和酵母菌的培養(yǎng)
羊種特異性基因核酸檢測試劑盒玫瑰紅鈉瓊脂規(guī)格:BR250g詳情介紹
改良纖維二糖-多粘菌素B-多粘菌素E瓊脂基礎(chǔ)(MCPC)規(guī)格:纖維二糖詳情介紹
艾格瓊脂規(guī)格:250g用途:用于過程中無菌監(jiān)測
性蛋白胨水顆粒規(guī)格:250g用途:用于霍亂弧菌選擇性增菌培養(yǎng)(SN標(biāo)準(zhǔn))
品紅亞硫鈉瓊脂平板(9cm)規(guī)格:10個/包用途:用于飲用水、水源水中總大腸菌群的選擇性分離和確證
瓊脂培養(yǎng)基N(化十六基三瓊脂)規(guī)格:250g用途:用于綠膿假單胞菌的分離培養(yǎng)
PCR檢測試劑盒:
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中,按100g:3ml的比例加入Trizol試劑,嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進行。
(1)加Trizol(按3ml/100mg組織,寧多勿少)置于玻璃勻漿器中勻漿后,冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中,4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中,室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol,振蕩15s,室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細吸取上層水相,移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol,振搖,置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min,EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清,紙巾吸干,加入75%乙醇1ml,振搖,充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇,空氣干燥10min(可離心加快干燥,盡量吸盡離心液體)。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中(可吹打混勻),-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度,所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳,顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
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