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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>核酸檢測(cè)試劑盒>>熒光PCR法>> 50T人核糖核酸酶P 核酸檢測(cè)試劑盒
對(duì)蝦黃頭病病毒(YHV)核酸定性檢測(cè)試劑盒
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 分類(lèi) | 貨號(hào) |
人核糖核酸酶P 核酸檢測(cè)試劑盒 | 熒光PCR 法FAM | FS-P10217 |
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
PCR技術(shù)的定量原理:
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擴(kuò)增曲線
在Real-time qPCR中,對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào),隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線性關(guān)系,所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶(hù)盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào);
3)客戶(hù)盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi),探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析。主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
慢生大豆根瘤菌生長(zhǎng)條件: 28-30℃培養(yǎng)基: 0053提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法;礦物油法
ATCC17588=IFO14165=IAM12668模式菌株模式菌株: yes種屬: Pseudomonas│stutzeri提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 0002生長(zhǎng)條件: 30℃
-123℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
沃遜納爾沙門(mén)氏菌培養(yǎng)基: CM005150 g,z51 -提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 37℃ -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
HBUM84819模式菌株: no安全等級(jí): 1種屬: Streptomyces│sp.土壤提供形式: 凍干物培養(yǎng)基: 0012生長(zhǎng)條件: 28℃
黑曲霉生長(zhǎng)條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no
ATCC15173=CCUG407=CIP7715=DSM30026=ICPB4221=IFO15125=JCM5490=LMG1231=NCTC8582=AS1.1800培養(yǎng)基: 0002模式菌株: yes種屬: Achromobacter│denitrificans提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 26℃ 真空冷凍干燥法;礦物油法;定期移植法
南方鹽單胞菌培養(yǎng)基: 471耐鹽機(jī)制的研究沉積物/深海沉積物提供形式: 凍干物模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 37℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
交鏈格孢生長(zhǎng)條件: 24-30℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no
-124℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
蘇云金芽孢桿菌培養(yǎng)基: 266模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 28-30℃ 真空冷凍干燥法
蠟狀芽孢桿菌培養(yǎng)基: 0002殺鱗翅目昆蟲(chóng)提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 30℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
銅綠假單胞菌生長(zhǎng)條件: 37℃培養(yǎng)基: CM0002提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2模式菌株: no -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
DSM17507=AS1.3432=JCM12465=T3-B9模式菌株,用于分類(lèi)學(xué)研究。模式菌株: yes種屬: Novosphingobium│taihuense沉積物/湖泊沉淀物提供形式: 凍干物培養(yǎng)基: 471生長(zhǎng)條件: 25℃
皮氏羅爾斯通氏菌培養(yǎng)基: 908模式菌株: no純水提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 30℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
白僵菌害蟲(chóng)生物防治模式菌株: no松墨天牛提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 14生長(zhǎng)條件: 28
CDC厭氧菌瓊脂250g厭氧菌的分離培養(yǎng)
M-腸道菌瓊脂 M-Enterococcus Agar 水中或其它物質(zhì)中腸球菌分離培養(yǎng)和計(jì)數(shù)(濾膜法或劃線法)
性肉湯 Acid Broth 250 性缺罐頭食品商業(yè)無(wú)菌檢驗(yàn)(GB標(biāo)準(zhǔn))
酵母基礎(chǔ),無(wú)維生素250g/瓶通過(guò)維生素的利用對(duì)酵母菌進(jìn)行分類(lèi)incubationmedia酵母基礎(chǔ),無(wú)維生素250g/瓶通過(guò)維生素的利用對(duì)酵母菌進(jìn)行分類(lèi)
NAMedium
抗生素7號(hào)培養(yǎng)基 Antibiotic Agar NO.7 250克 頭孢噻圬鈉等的效價(jià)測(cè)定
抗生素8號(hào)培養(yǎng)基 Antibiotic Agar NO.8 250克 去甲萬(wàn)古霉素的效價(jià)測(cè)定
標(biāo)準(zhǔn)平板計(jì)數(shù)瓊脂培養(yǎng)基 SPCA 250克 細(xì)菌總數(shù)的計(jì)數(shù)
平板計(jì)數(shù)瓊脂 PCA 250克 食品細(xì)菌總數(shù)測(cè)定和平板計(jì)數(shù)
人核糖核酸酶P 核酸檢測(cè)試劑盒瓊脂培養(yǎng)基H規(guī)格:250g用途:用于腸道致病菌的選擇性分離
亞硒鹽增菌培養(yǎng)基規(guī)格:BR250g詳情介紹
含鐵牛奶培養(yǎng)基規(guī)格:250g用途:用于產(chǎn)氣莢膜梭菌“暴烈發(fā)酵”試驗(yàn)
RV肉湯規(guī)格:10ml*20支/包用途:用于沙門(mén)氏菌選擇性增菌培養(yǎng)
含青霉素酶TSA培養(yǎng)基平板(7cm)規(guī)格:10個(gè)/包用途:用于環(huán)境、器皿、設(shè)備和表面的無(wú)菌檢測(cè)
四硫磺鹽煌綠增菌液基礎(chǔ)(TTB)規(guī)格:0.1%煌綠水用途:0.1%煌綠每支含量
PCR檢測(cè)試劑盒:
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中,按100g:3ml的比例加入Trizol試劑,嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol(按3ml/100mg組織,寧多勿少)置于玻璃勻漿器中勻漿后,冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中,4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中,室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol,振蕩15s,室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相,移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol,振搖,置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min,EP管底部可見(jiàn)白色沉淀物。
(9)棄上清,紙巾吸干,加入75%乙醇1ml,振搖,充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇,空氣干燥10min(可離心加快干燥,盡量吸盡離心液體)。
(12)半透明時(shí)將RNA溶于去核酸酶的水20ul中(可吹打混勻),-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度,所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳,顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
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