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貨號(hào)	FS-X10531

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。

中文名稱：ALK4/ALK5抑制劑

英文名稱：EW-7197

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg

貨號(hào)：FS-X10531

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：EW-7197

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg

EW-7197是一個(gè)強(qiáng)的，有選擇性的TGF-β receptor ALK4/ALK5抑制劑，IC50值分別是13nM和11nM。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：1352608-82-2

純度：99.12%

分子式：C??H??FN?

分子量：399.42

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

石頭農(nóng)霉菌磷化微管相關(guān)蛋白抗體Anti-ITGAM Antibody絲蛋白31(PRSS31)

豐盛毛霉磷化微管相關(guān)蛋白抗體Anti-ITGA7 Antibody絲蛋白23(PRSS3)

埃里鏈格孢磷化微管相關(guān)蛋白抗體Anti-ITGAM Antibody絲蛋白23(PRSS23)

肺炎克雷伯氏菌磷化微管相關(guān)蛋白抗體Anti-ITGAM Antibody絲蛋白21(PRSS21)

多粘類芽胞桿菌磷化微管相關(guān)蛋白抗體Anti-ITGAM Antibody絲蛋白2(PRSS2)

間座殼屬磷化微管相關(guān)蛋白抗體Anti-ITGAM Antibody絲蛋白12(PRSS12)

白地霉MED17抗體Anti-ITGAX Antibody絲蛋白1(PRSS1)

plenti sgRNA(MS2)_puro(Plasmid#73795)pSAMca089-p FUGW-U6-BsmBl-sg RNA009-EF1α-Puro-WPRE甲狀腺激受體相互作用13/瘤病16型E1結(jié)合蛋白抗體Anti-ITGB1 Antibody(PB0063)絲/蘇激4(STK4)

釀酒酵母甲狀腺激受體β抗體(THβ1，THβ2)Anti-ITGB4 Antibody絲/蘇激39(STK39)

壯觀絲衣霉血小板跨膜反應(yīng)蛋白1抗體Anti-ITGB2 Antibody絲/蘇激3(STK3)

蛛絲細(xì)薄菌組織因子抗體Anti-ITGB2 Antibody(PB0111)絲/蘇激25(STK25)

高山被孢霉腫瘤壞死因子配體超家族成員13抗體Anti-ITGB3 Antibody絲/蘇激19(STK19)

海床游動(dòng)微菌特異定蛋白質(zhì)編碼Y1抗體Anti-ITGB4 Antibody絲/蘇激16(STK16)

蠟狀芽孢桿菌跨膜蛋白4超家族成員3抗體Anti-ITK Antibody絲/蘇激11(STK11)

大腸桿菌Toll樣受體7抗體Anti-ITGB4 Antibody(PB0064)絲/蘇激10(STK10)

黑腐皮殼菌T白血病同源盒蛋白3抗體Anti-ITLN1 Antibody絲/蘇/酪激1(STYK1)

分泌性磷蛋白24抗體柱狀假絲酵母小鼠胎兒真皮成纖維細(xì)胞

抗藥蛋白抗體雷氏普羅威登斯菌小鼠表皮角質(zhì)形成細(xì)胞

細(xì)胞外基質(zhì)底物反應(yīng)蛋白2抗體阿伯丁沙門氏菌小鼠皮下脂肪細(xì)胞

肌蛋白結(jié)合蛋白γ2抗體千葉類芽胞桿菌小鼠胎兒表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞
ALK4/ALK5抑制劑枯草芽孢桿鄰菲咯啉鹽鹽一水合物高密度脂蛋白膽固

灰色鏈霉 (1S,2S)-(+)-1,2-Cyclohexanediamino-N,N'-bis(3,5-di睪酮

楊奇青霉硫化錳過氧化

蘇云金芽孢桿 (R)-3-氨基-1-BOC-骨保護(hù)

皺瓣革 3,4-二硫骨成型蛋白2

解脂亞羅酵母 2-正已基噻吩骨鈣

地衣芽孢桿 4-苯乙核糖核L

竹針孢座囊 2,3-二氟-6-甲氧基苯甲核因子κB

水稻節(jié)桿六釕黑色瘤分化相關(guān)基因5

砷、銻、鉍、汞、銀化物檢測試劑三(硅基)硅烷紅生成

大腸埃希氏 2,6-二溴蒽環(huán)磷腺

黑木耳 3-羥基氮雜環(huán)丁烷鹽鹽活性氧簇

葡萄座腔 N-二苯甲基氮雜環(huán)丁烷-3-肌特異性肌動(dòng)蛋白

毛束霉 N-丁基吡啶六氟磷鹽雞癌基因產(chǎn)物

油菜核病 12-羥基-4,7,10-三氧雜十二叔丁酯低密度脂蛋白
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)