實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

PCR技術(shù)的定量原理：
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擴(kuò)增曲線
在Real-time qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線性關(guān)系，所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號(hào)；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于液中。
PCR檢測(cè)試劑盒：
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時(shí)將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
 No714D　S模式菌株: no種屬: Shigella│sonnei提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2培養(yǎng)基: CM0051生長(zhǎng)條件: 37℃

鏈霉菌屬菌種作用于PaSecA模型模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: CM0027生長(zhǎng)條件: 28C

 -187℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

籃狀菌屬培養(yǎng)基: CM0018產(chǎn)生Glauconic acid or Glaucanic acid提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 28C -80℃冰箱凍結(jié)

 AS2.126清酒酵母模式菌株: no種屬: Saccharomyces│cerevisiae提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: CM0077生長(zhǎng)條件: 28℃

副溶血弧菌 -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法生長(zhǎng)條件: 22℃提供形式: 凍干物；凍結(jié)物模式菌株: no培養(yǎng)基: 820

尖鐮孢古巴?；停ㄏ憬犊菸【┥L(zhǎng)條件: 25℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no

紫色小單孢菌新藥篩選模式菌株: no湖底泥提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: CM0012生長(zhǎng)條件: 37C

 ivcas7.00075模式菌株: no安全等級(jí): 1種屬: Bacillus│thuringiensis土壤提供形式: 凍干物培養(yǎng)基: 0002生長(zhǎng)條件: 30℃

 -188℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

 LMG20263=DSM40172=ATCC19805=ATCC19921=CBS5模式菌株: yes安全等級(jí): 1種屬: Streptomyces│roseofulvus土壤提供形式: 凍干物模式菌株培養(yǎng)基: 0038

DSM44409T模式菌株模式菌株: yes種屬: Amycolatopsis│keratiniphila subsp. keratiniphila提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: CM0027生長(zhǎng)條件: 28C

傳染性喉氣管炎病用于科研模式菌株: no病雞提供形式: 凍結(jié)物安全等級(jí): 2培養(yǎng)基: 0生長(zhǎng)條件: 37

熱帶假絲酵母近海酵母模式菌株: no生物樣/白骨壤/葉提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 513生長(zhǎng)條件: 28℃

大腸埃希氏菌病生活周期及病基因表達(dá)調(diào)控的研究模式菌株: noLB培養(yǎng)基提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 304生長(zhǎng)條件: 37℃

水蛹假交替單胞菌潛在的生物活性微生物/軟珊瑚共附生菌，用于篩選活性物質(zhì)產(chǎn)生菌 產(chǎn)酶微生物/脂酶（三丁甘油酯）模式菌株: no生物樣/軟珊瑚提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 471生長(zhǎng)條件: 28℃

PALCAM瓊脂基礎(chǔ)26070250g單增李斯特氏菌的選擇性分離培養(yǎng)(GB4789.30-20/T0005)。

MRS 瓊脂 (CM0361) Oxoid incubation media MRS 瓊脂 (CM0361) Oxoid

施氏假單胞菌 支/瓶

腸道菌計(jì)數(shù)瓊脂(VRBDA)250g腸道菌計(jì)數(shù)和腸桿菌科鑒別

AgarmediumL

改良McBride瓊脂培養(yǎng)基  Modified Mcbride Agar Base  250克  單增李氏菌選擇性分離

Fraser培養(yǎng)基  Fraser Medium  250克  李氏菌的增菌培養(yǎng)

改良緩沖蛋白胨水  MBPW  250克  李氏菌的增殖

檸檬鹽培養(yǎng)基  Citrate Agar  250克  大腸桿菌和產(chǎn)氣桿菌的鑒別
禽腺病毒(FADV)核酸檢測(cè)試劑盒TCH（噻吩-2-羧酰肼）規(guī)格：0.1g用途：加入改良羅氏培養(yǎng)基中制成TCH培養(yǎng)基，用于分枝桿菌鑒定

0.1%煌綠規(guī)格：1ml/支*20用途：每支添加于100ml HB4086中

10ul接種環(huán)規(guī)格：400支/包，10包詳情介紹

胰酪胨大豆羊血瓊脂基礎(chǔ)規(guī)格：250g用途：用于蠟樣芽孢桿菌的溶血測(cè)試驗(yàn) (SN標(biāo)準(zhǔn))

碳?xì)溻c瓊脂基礎(chǔ)規(guī)格：250g用途：用于炭疽桿菌的莢膜培養(yǎng)