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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> 丙酮酸激酶M2激活劑(TEPP-46)
貨號(hào) | FS-X10316 |
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產(chǎn)品介紹:
英文名稱:pyruvate kinase M2 activator 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg TEPP-46是一種有效的,選擇性的酸激酶M2(pyruvate kinase M2)的激活劑,半數(shù)激活濃度AC50值為92nM,對(duì)其他PKM1,PKL和PKR作用較小或沒有作用。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):1221186-53-3 別名:ML-265 純度:99.35% 分子量:372.46 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
中文名稱:丙酮酸激酶M2激活劑(TEPP-46)
英文名稱:pyruvate kinase M2 activator
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號(hào):FS-X10316
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
慢生根瘤菌富含亮重復(fù)蛋白25抗體Human PAPSS2 髓樣分化因子88(MyD88)
四川散斑殼白介31受體a抗體Human PAR2 髓樣分化蛋白2(MD-2)
中國(guó)擬迷孔菌LRSAM1蛋白抗體Human PARD3 髓性核分化抗原(MNDA)
波蘭青霉LIM結(jié)構(gòu)域蛋白1抗體Human PARD6B 髓系觸發(fā)受體-1(TREM-1)
叢毛單胞菌乳菌菌體表面蛋白抗體Human PARN 髓鞘相關(guān)糖蛋白抗體(MAG Ab)
日本根霉透明質(zhì)受體抗體Human PARD3 髓鞘相關(guān)糖蛋白(MAG)
香菇白三烯A4水解抗體Human PARP10 (Poly [ADP-ribose] polymerase 10) 髓鞘堿性蛋白抗體(MBP)
耐熱芽孢芽孢桿菌肝臟X受體抗體Human PAMR1 髓鞘堿性蛋白抗體(MBP antibody)
異常畢赤酵母溶體蛋白跨膜β4抗體Human PAN2 髓鞘蛋白P0(MPZ)
枯草芽孢桿菌富含亮重復(fù)神經(jīng)元5抗體Human BRCA1(Breast cancer type 1 susceptibility protein) 髓磷脂堿性蛋白(MBP)
蠟狀芽孢桿菌親脂性蛋白B抗體Human PANK1 髓磷脂P2蛋白(PMP2)
芽胞桿菌癌癥亮拉鏈下調(diào)因子1抗體Human PANK2 髓過氧化物特異性抗中性粒胞質(zhì)抗體IgG(MPO-ANCA IgG)
噬幾丁質(zhì)菌屬賴酰氧化相關(guān)蛋白2抗體Human PAICS(Multifunctional protein ADE2) 髓過氧化物(MPO)
湖泊黃桿菌基膜聚糖蛋白抗體Human PAGE2 性鐵蛋白(AIF)
側(cè)孢短小芽胞桿菌李斯特菌溶胞抗體Human PANK3 性神經(jīng)鞘磷脂(ASM)
少根根霉亮羧基轉(zhuǎn)移1抗體Human PAIP1 性磷(ACP)
叢毛單胞菌Comamonas│testosteroni 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)(T)人參皂Rb2
嗜熱脂肪地芽抱桿菌Geobacillus│stearothermophilus 質(zhì)量規(guī)格:>99.0%(T)人參皂Rb1
海迪茨氏菌Dietzia│maris 質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)擬人參皂F11
丙酮酸激酶M2激活劑(TEPP-46)大腸埃希氏 1-氟-3-基苯8異前列腺
釀酒酵母 1-戊基-3-氟苯8-異前列腺F2α
擬青霉 4-乙基溴骨I型膠原交聯(lián)C端頂端肽
葡萄座腔屬 鄰氨基-N,N-二甲酰Ⅰ型膠原N末端肽
黑附球 5-氨基-2-甲Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽
側(cè)孢短芽孢桿 3--5-甲氧基Ⅱ型肺泡表面抗原
總狀共頭霉 2-基Ⅱ型膠原
Lysinibacillus 3,6-二氟鄰苯二甲酐Ⅱ型膠原C端肽
硬結(jié)桿 4-羥基-四氟Ⅱ型膠原抗體
異常威克漢姆酵母 2-氨基-5-Ⅲ型膠原
空腸彎曲桿 2-溴-5-氟-3-硝基吡啶Ⅲ型前膠原氨基端肽
高山被孢霉 5-氨甲基-1,3,4-惡二唑-2-甲乙酯鹽鹽Ⅳ型膠原
紫色紅曲 3,4,5,6-四氟鄰苯二甲Agouti相關(guān)蛋白
pLVX Tre3G 三乙鹽AKT蛋白
釀酒酵母 3-溴甲AMPA離子能谷受體1
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