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貨號 | FS-X10529 |
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產(chǎn)品介紹:
英文名稱:eFT508 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg eFT508是一種高效,高選擇性,可MNK1和MNK2抑制劑,其IC50值均為1-2nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:1849590-01-7 純度:99.49% 分子式:C??H??N?O? 分子量:340.38 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
中文名稱:MNK1和MNK2抑制劑(eFT508)
英文名稱:eFT508
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10529
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。
解淀粉芽孢桿菌解淀粉亞種環(huán)指蛋白22抗體Anti-IRF8 Antibody絲裂原激活蛋白激8(MAPK8)
大腸埃希氏菌糖原生成相互作用蛋白抗體Anti-IRF4 Antibody(PB0220)絲裂原激活蛋白激7(MAPK7)
紫蓋蜜環(huán)菌環(huán)指蛋白89Anti-IRF5 Antibody(PB0689)絲裂原激活蛋白激14(MAPK14)
地衣芽孢桿菌谷酰轉(zhuǎn)2抗體Anti-IRF9 Antibody絲裂原激活蛋白激11(MAPK11)
帶化紅球菌T淋巴膜蛋白4抗體Anti-IRS1 Antibody絲聚蛋白2(FLG2)
球孢白僵菌磷化微管相關(guān)蛋白抗體Anti-ISG15 Antibody絲聚蛋白(FLG)
黃色籃狀菌磷化微管相關(guān)蛋白抗體Anti-IRS1 Antibody絲甘蛋白聚糖(SRGN)
交角耳磷化微管相關(guān)蛋白抗體Anti-IRS2 Antibody絲蛋白Cγ(FLNC)
木耳脫氫膽固還原14抗體Anti-ISG15 Antibody絲蛋白Bβ(FLNβ)
葉點霉菌甲狀腺結(jié)合球蛋白抗體Anti-ISL1 Antibody絲組合因子5(SERINC5)
玫煙色棒束孢轉(zhuǎn)導(dǎo)β1X連鎖蛋白抗體Anti-ITGA1 Antibody絲組合因子4(SERINC4)
枯草芽孢桿菌內(nèi)皮B受體抗體Anti-ITCH Antibody絲組合因子3(SERINC3)
樟疫霉轉(zhuǎn)導(dǎo)β1X連鎖受體蛋白1抗體Anti-ITCH/AIP4 Antibody絲組合因子2(SERINC2)
平菇甲狀腺受體相關(guān)蛋白220抗體Anti-ITGA1 Antibody絲組合因子1(SERINC1)
熒光假單胞菌磷化甲狀腺受體相關(guān)蛋白220抗體Anti-ITGA2B Antibody絲棕櫚酰轉(zhuǎn)移長鏈堿性亞基3(SPTLC3)
鹽水海桿狀菌抑癌基因5抗體Anti-ITGA1 Antibody絲消旋(SRR)
溶質(zhì)載體家族39成員11抗體鼠乳桿菌小鼠腦靜脈血管平滑肌細胞
SAMD9蛋白抗體致病性大腸埃希氏菌小鼠腦靜脈血管內(nèi)皮細胞
染色質(zhì)組裝因子1P155抗體假單胞桿菌小鼠角膜上皮細胞
SARM1蛋白抗體雪腐鐮刀菌(斜面)小鼠角膜成纖維細胞
MNK1和MNK2抑制劑(eFT508)魯氏毛霉 異基 β-D-硫代吡喃葡萄糖半胱蛋白12
淺黃色假單胞 N-乙酰-D-谷半胱蛋白3
絲球毛霉 2-甲基-3-乙半胱蛋白8
pOJ260 苯并[g,h,i]芘半胱蛋白9
藍微褐鏈霉 Pramipexole 2HCl Monohydrate表皮生長因子
灰黃青霉 2-氨基苯頻哪酯二
費氏中華根瘤 3-喹啉二酰
高山被孢霉 4-氟-2-甲氧基苯甲補體蛋白3
曲霉 1-Cbz-4-酮補體蛋白4
釀酒酵母 叔丁鋰超氧化物歧化
聚生殼 2-芐氧基苯傳染性法氏囊病病抗體
新城疫病 2,6-二氟雌二
細鏈格孢 2,6-二氟芐基雌
pME6032 4-溴-3-甲氧基苯促卵泡
死亡谷芽孢桿 4,4-二三聯(lián)苯促腎上腺皮質(zhì)
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