AG 490 (JAK抑制劑)-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-X10241

中文名稱：AG 490 (JAK抑制劑)

英文名稱：Tyrphostin B42

產(chǎn)品規(guī)格：5mg

貨號：FS-X10241

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：Tyrphostin B42

產(chǎn)品規(guī)格：5mg

AG-490 (Tyrphostin B42)是一種EGFR 抑制劑，IC50為0.1 μM，作用于EGFR 比作用于ErbB2選擇性高135倍，對JAK2也有抑制作用，對Lck，Lyn，Btk，Syk 和Src 沒有抑制活性。

分子量：294.30

化學(xué)式：C17H14N2O3

：133550-30-8

儲存：-20℃，有效期24個月

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學(xué)檢測。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)

釀酒酵母人類白抗原G抗體（N端）Human SLCO4C1 大鼠TGF-β誘導(dǎo)早期基因1(TIEG1)免疫試劑盒

Luteolibacter人類白抗原G抗體（C端）Human SLFNL1 大鼠Tau蛋白免疫試劑盒

埃希氏菌屬缺氧誘導(dǎo)基因95抗體Human SLC43A1 大鼠TAR DNA結(jié)合蛋白43(TARDBP)免疫試劑盒

白乳菇泛蛋白連接E2抗體Human SLCO6A1 大鼠Syndecan-1/CD138(SDC1)免疫試劑盒

高地芽胞桿菌同源盒蛋白HOXC9抗體Human SLC27A3 大鼠Smad7 免疫試劑盒

晦澀小粘束霉環(huán)化核調(diào)控陽離子通道蛋白亞型2/4抗體Human SLC30A6 大鼠Smad1 免疫試劑盒

果生鏈核盤菌轉(zhuǎn)錄因子HELT蛋白抗體Human RHOC(Rho-related GTP-binding protein RhoC) 大鼠SHC轉(zhuǎn)化蛋白1(SHC1)免疫試劑盒

云南球蓋菇轉(zhuǎn)錄因子HES6抗體Human SLC35F2 大鼠S100B蛋白(S-100B)免疫試劑盒

騷動厄氏菌同源盒蛋白H6亞型2抗體Human SLC35A1 大鼠S100-A5蛋白(S100A5)免疫試劑盒

Sphingomonas phyllosphaerae硫乙酰肝6腦脂轉(zhuǎn)硫1抗體Human SLC34A2 大鼠Rho相關(guān)GTP結(jié)合蛋白RhoE 免疫試劑盒

球孢白僵菌神經(jīng)保護肽HN抗體Human SLC36A4 大鼠Rho鳥交換因子7(Arhgef7/Pak3bp/Pixb)免疫試劑盒

美澳型核果褐腐病菌大鼠細小病H-1株(H-1)抗體（N端）Human SLC30A6 大鼠Ras相關(guān)蛋白Rab-11A 免疫試劑盒

麗齒菌屬透明質(zhì)合成1抗體Human SLC25A18 大鼠Ras相關(guān)C3肉底物1(RAC1)免疫試劑盒

美澳型核果褐腐病菌缺氧誘導(dǎo)因子3α/HIF-3α抗體Human SLC34A2 大鼠P選擇(P-Selectin/CD62P)免疫試劑盒

黑曲霉缺氧誘導(dǎo)因子脯酰4羥化抗體Human SLC25A15 大鼠P物質(zhì)受體(SP-R)免疫試劑盒

溶血性曼氏桿菌透明質(zhì)2/玻璃2抗體Human SLC25A22 大鼠P物質(zhì)(SP)免疫試劑盒

炭疽芽孢桿菌Bacillus│anthracis 質(zhì)量規(guī)格：分析標(biāo)準(zhǔn)品,99.5%長春質(zhì)堿

矩圓黑盤孢Melanconium│oblongum Berk. 質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=3%文多靈

淡紫擬青霉Paecilomyces│sp. 質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=6%(R型)原人參二
AG 490 (JAK抑制劑)球形賴芽孢桿 2-芐基-1-乙his標(biāo)簽蛋白

蚜蟲莫氏黑粉 2--5-氟磷化環(huán)磷腺

金黃色葡萄球 4--N,N-二苯基苯球蛋白A抗體

納西桿屬 2-氨基-5-溴破傷風(fēng)IgG

金乳牛肝 2-氨基-6-血管生成1

美澳型核果褐腐病 2--5-氟吡啶-3-羧球蛋白G a2

美澳型核果褐腐病 5-氨基-2-溴-3-內(nèi)質(zhì)網(wǎng)氨基肽1

門多薩假單胞 2-氨基-3--5-溴吡啶乙酰

蠟樣芽孢桿溴甲基環(huán)戊烷-SH

熱帶假絲酵母 2-氨基-3--5-溴吡啶N-酰

粉紅聚端孢霉 2-基硅氧基-1,3-丁二烯琥珀酰

暗褐色毛霉 4-異硫基苯組蛋白

枯草芽孢桿 6-羥基-3-噠單水合物抗核糖體P蛋白抗體

三葉草根瘤香葉基酮載脂蛋白E2

杰丁畢赤酵母 5-甲基-3,4-二苯基異噁唑載脂蛋白E4

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