NADMENAD蘋果酸酶檢測試劑盒紫外分光光度法-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	FS-01S63249

商品介紹：

測定意義

ME廣泛存在于微生物、培養(yǎng)細(xì)胞、動物和植物胞漿中，尤其在植物組織中活性較高。ME催化蘋果酸氧化脫羧的可逆反應(yīng)，產(chǎn)生丙酮酸和CO2，以及伴隨NAD(P)+的還原反應(yīng)，是蘋果酸代謝的關(guān)鍵酶。ME活性與生物合成和抗氧化密切相關(guān)。近年來植物ME活性測定較多，已經(jīng)成為抗氧化研究的熱點。根據(jù)輔酶專一性和對底物特異性的不同，可將ME分為NAD-ME(EC1.1.1.38)和NADP-ME(EC1.1.1.40)。

測定原理：

NAD-ME催化NAD+還原成NADH，在340nm下測定NADH增加速率。

需自備的儀器和用品:

紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、1mL石英比色皿和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 200μL×1 支，4℃保存；

試劑三：液體 4mL×1 瓶，4℃保存；

試劑四：粉劑×2 瓶，4℃保存。

公司產(chǎn)品僅用于科研提供的生化試劑盒，質(zhì)量信得過產(chǎn)品，售后完善。服務(wù)于高校及免疫學(xué)科研單位，竭誠為您提供更周到的服務(wù)更優(yōu)質(zhì)的產(chǎn)品。

產(chǎn)品名稱：NADMENAD蘋果酸酶檢測試劑盒紫外分光光度法

規(guī)格：50管/48樣

檢測方法：紫外分光光度法

貨號：FS-01S63249
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操作步驟:

實驗開始前，各試劑均應(yīng)平衡至室溫（試劑不能直接在37℃溶解）；試劑或樣品稀釋時，均需混勻，混勻時盡量避免起泡。實驗前應(yīng)預(yù)測樣品含量，如樣品濃度過高時，應(yīng)對樣品進(jìn)行稀釋，以使稀釋后的樣品符合試劑盒的檢測范圍，計算時再乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

1. 加樣：分別設(shè)空白孔、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。空白孔加樣品稀釋液100μl，余孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品或待測樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。為保證實驗結(jié)果有效性，每次實驗請使用新的標(biāo)準(zhǔn)品溶液。

2. 棄去液體，甩干，不用洗滌。每孔加檢測溶液A工作液 100μl（在使用前一小時內(nèi)配制），酶標(biāo)板加上覆膜, 37℃反應(yīng)60分鐘。

3. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，大約400μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

4. 每孔加檢測溶液B工作液（同檢測A工作液） 100μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃反應(yīng)60分鐘。

5. 溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)液體，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干（也可輕拍將孔內(nèi)液體拍干）。

6. 依序每孔加底物溶液90μl，酶標(biāo)板加上覆膜37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時肉眼可見標(biāo)準(zhǔn)品的前3-4孔有明顯的梯度蘭色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7. 依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)，此時藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了保證實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8. 用酶聯(lián)儀在450nm波長依序測量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后立即進(jìn)行檢測。

粗酶液提取：

1、細(xì)胞或組織樣品的制備：

培養(yǎng)細(xì)胞：先收集細(xì)胞到離心管內(nèi)，離心后棄上清；按照細(xì)胞數(shù)量（104個）：提取液體積（ml）為500~1000：1的比例（建議500萬細(xì)胞加入1ml提取液），超聲波破碎細(xì)胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復(fù)30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。組織：按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

豬Hedgehog相互作用蛋白(HHIP)聯(lián)免疫試劑盒冷溫木拉克酵母CENP-F (D6X4L) Rabbit mAb

豬α乳清蛋白(α-La)聯(lián)免疫試劑盒泗川假黃單胞PAX8 (D2S2I) Rabbit mAb

豬促有絲分裂因子(MF/MPF)聯(lián)免疫試劑盒枯草芽孢桿Phospho-CXCR4 (Ser339) Antibody

豬叉頭框蛋白O3(FOXO3)聯(lián)免疫試劑盒堅強芽孢桿OX40L (D6K7R) Rabbit mAb (IHC Specific)

豬質(zhì)膜膜泡關(guān)聯(lián)蛋白 (PLVAP)聯(lián)免疫試劑盒植物乳桿Phospho-SEK1/MKK4 (Ser257) (C36C11) Rabbit mAb (PE Conjugate)

豬α半乳糖基抗原(Gal)聯(lián)免疫試劑盒炭球PKCγ (D2V6T) Rabbit mAb

豬前列腺內(nèi)過氧化物合2(PTGS2/COX-2)聯(lián)免疫試劑盒固氮假單胞4-1BBL/CD137L/TNFSF9 (D6V6K) Rabbit mAb

豬肌鈣蛋白T(Tn-T)聯(lián)免疫試劑盒釀酒酵母FBP1/FBPase 1 (D2T7F) Rabbit mAb

豬熱休克蛋白40(HSP-40)聯(lián)免疫試劑盒地衣芽孢桿FnCpf1 (Strain <i>U112</i>) Antibody

豬性唾液脯豐富蛋白1(PRB1)聯(lián)免疫試劑盒糞產(chǎn)桿IFITM3 (D8E8G) XP® Rabbit mAb

豬甲胎蛋白異質(zhì)體3(AFP-L3)聯(lián)免疫試劑盒大腸埃希氏(大腸桿)*IFITM3 (D8E8G) XP® Rabbit mAb

豬前列腺D合成(PGDS)聯(lián)免疫試劑盒芽胞桿Cre Recombinase (D7L7L) XP® Rabbit mAb (PE Conjugate)

豬蛋白激活受體2(PAR2)聯(lián)免疫試劑盒格氏糖多孢DHX29 (D19E10) Rabbit mAb

豬前列腺E受體3(EP3)聯(lián)免疫試劑盒白僵Doxorubicin

豬小表皮粘蛋白(SBEM)聯(lián)免疫試劑盒枯草芽孢桿TBC1D1 (G689) Antibody
NADMENAD蘋果酸酶檢測試劑盒紫外分光光度法周期后期促進(jìn)蛋白亞基11抗體Human IVD(Isovaleryl-CoA dehydrogenase) ELISA Kit大鼠抗性磷5b（TRACP-5b）ELISA試劑盒,

腺瘤性結(jié)腸息肉病蛋白2抗體Human ITPR1 ELISA Kit大鼠抗促甲狀腺受體抗體（TRAb）ELISA試劑盒,

磷化分裂周期蛋白16抗體Human ISG20 ELISA Kit大鼠心肌營養(yǎng)1（CT-1）ELISA試劑盒,

DNA修復(fù)相互作用蛋白抗體Human IVNS1ABP ELISA Kit大鼠脫氧吡/脫氧吡啉（DPD）ELISA試劑盒,

脂肪膜相關(guān)蛋白抗體Human ISM2 ELISA Kit大鼠骨橋（OPN）ELISA試劑盒,

載脂蛋白A1結(jié)合蛋白抗體抗體Human IWS1 ELISA Kit大鼠降鈣基因相關(guān)肽（CGRP）ELISA試劑盒,

載脂蛋白B-mRNA編輯復(fù)合物1抗體Human ISYNA1 ELISA Kit大鼠S100蛋白（S-100）ELISA試劑盒,

載脂蛋白B-mRNA編輯復(fù)合物2抗體Human ISG20L2 ELISA Kit大鼠過氧化物體增殖因子活化受體γ（ PPAR-γ）ELISA試劑盒,