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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>核酸檢測試劑盒>>熒光PCR法>> 50T狐貍源性成分(Vulpes)核酸檢測試劑盒
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:狐貍源性成分(Vulpes)核酸檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品貨號(hào):FS-P10527
產(chǎn)品分類:熒光PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
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實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR:
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限,實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號(hào)的強(qiáng)度,并記錄在電腦軟件之中,通過對(duì)每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的:
1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí),剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期(對(duì)數(shù)期),此時(shí)微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性,即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對(duì)數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知樣品進(jìn)行定量測定,因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,重現(xiàn)性*定量方法,已得到的*,廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中,待測樣品與競爭模板用同一對(duì)引物同時(shí)擴(kuò)增(其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí),內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強(qiáng)度,以內(nèi)標(biāo)為對(duì)照定量待檢測模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn),若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實(shí)現(xiàn)定量檢測目的。
釀酒酵母培養(yǎng)基: CM0013用于酒精。提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no生長條件: 25-28℃ 真空冷凍干燥法
ATCC49919=CIP106990=DSM420=KCTC9902=LMG16253=NBRC15511模式菌株模式菌株: yes種屬: Arthrobacter│nicotinovorans提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 2生長條件: 30℃
秋楓擲孢酵母生長條件: 25℃培養(yǎng)基: 0013提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
枝芽胞桿菌培養(yǎng)基: 471大洋細(xì)菌沉積物/深海沉積物提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no生長條件: 4-20℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
慢生大豆根瘤菌培養(yǎng)基: 0053可用于根瘤菌菌劑提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no生長條件: 28-30℃ 真空冷凍干燥法;礦物油法
-832℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
黃曲霉培養(yǎng)基: 0015產(chǎn)生果膠酶提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2模式菌株: no生長條件: 25-28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
CBS792=IFO0794培養(yǎng)基: 0013模式菌株: no種屬: Debaryomyces│hansenii var. fabryi提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長條件: 25-28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
黃海鞘氨醇盒菌培養(yǎng)基: 471微生物/耐冷菌沉積物/表層沉積物提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no生長條件: 15℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
ATCC15521模式菌株: yes安全等級(jí): 1種屬: Lactobacillus sakei subsp. sakei清酒自動(dòng)發(fā)酵劑提供形式: 凍干物培養(yǎng)基質(zhì)控,分類學(xué)研究。培養(yǎng)基: MRS培養(yǎng)基:酪蛋白胨10.0 g,牛肉提取物10.0 g,酵母提取物5.0 g,葡萄糖5.0 g,乙鈉5.0 g,檸檬二氨2.0 g,吐溫80 1.0 g,K2HPO4 2.0 g,MgSO4·7H2O 0.02g,MnSO4·H2O 0.05 g,CaCO3 20.0 g,蒸餾水1000毫升,pH 6.8。
金黃色葡萄球菌用于科研模式菌株: no患病奶牛提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2培養(yǎng)基: 335生長條件: 37
大腸埃希菌用于科研模式菌株: no死亡仔豬十二指腸提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2培養(yǎng)基: 335生長條件: 37
-833℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
毛殼菌屬活性物質(zhì);抗凝血模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: CM0014生長條件: 28C
球孢白僵菌培養(yǎng)基: 0014昆蟲生物防治提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no生長條件: 25-28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
米根霉甜酒及小曲酒,糖化淀粉。模式菌株: no大曲提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: CM0085生長條件: 28-30℃
2,5-二溴對(duì)二二乙酯 亞磷三乙酯 溴甲基環(huán)己烷
3--2-(2--5-基-氧基)-5-基 乙芐酯 溴甲基環(huán)丁烷
2-溴-5-甲基 二乙二醇丁醚醋酯 右旋香芹
2-丙烯環(huán)己基酯 偶氮二二乙酯 小茴香油
Isobutylene oxide 甲基環(huán)氧丙烷 558-30-5
2,4-DIAMINOANISOLE 二基甲醚 615-05-4
(Trifluoromethoxy)benzene 氧基 456-55-3
2-thiol 2-硫酚 91-60-1
大鼠早老素2(PS2)ELISA試劑盒 ,英文名: PS2 ELISA Kit
Felis parvovirus (FPV) ELISA Kit 貓細(xì)小病抗體(FPV)ELISA試劑盒
MouseIerleukin2,IL-2ELISAkit 小鼠白介素2(IL-2)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHumangelsonELISAKit人凝膠原蛋白規(guī)格:48T/96T
吸煙者人體肺組織微粒體組分(5毫克/毫升)500微升
ELISAKitSDF-1a/CXCL12大鼠基質(zhì)衍生因子1a規(guī)格:48T/96T
狐貍源性成分(Vulpes)核酸檢測試劑盒草烏甲素107668-79-1英文名:Bulleyaconitine A
英文別名:Aconitane, methanone deriv
登錄號(hào):107668-79-1
分子式:C35H49NO9
分子量:627.76
分子結(jié)構(gòu):
外觀:白色粉末
規(guī)格:20mg/支
純度:≥ 98%
用途:用于含量測定/鑒定/藥理實(shí)驗(yàn)等
提取來源:為毛茛科植物北烏頭Aconitumkusnezoffii Reichb.的塊根
溶解性:易溶于乙醇、三、中,在水中不溶;在稀鹽、稀硫中極易溶解。
熔點(diǎn):160~165℃
藥理藥效:適用于治療癌癥晚期疼痛、風(fēng)濕及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、肩周炎、肩臂痛、落枕、骨關(guān)節(jié)炎、良性關(guān)節(jié)痛、腰及四肢關(guān)節(jié)扭傷、挫傷、腰肌勞損及腰背痛、坐骨神經(jīng)痛、肌纖維炎及肋軟骨炎、帶狀皰疹、感冒頭痛、牙痛等。
貯存條件: 4℃冷藏、密封、避光
有效期: 2年
PCR的反應(yīng)條件:
因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小,設(shè)定25~30個(gè)循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少,擴(kuò)增量不足;如果循環(huán)次數(shù)太多,則會(huì)出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預(yù)備實(shí)驗(yàn)可2℃間隔進(jìn)行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時(shí),每kbp大體可設(shè)定30秒~1分鐘;當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時(shí), 時(shí)間設(shè)定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時(shí)會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物;Anneal溫度太低時(shí),容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外,Extension時(shí)間太短時(shí),會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物或者會(huì)有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成;而Extension時(shí)間太長時(shí),會(huì)出現(xiàn)Smear。
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