實(shí)時熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實(shí)時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

PCR技術(shù)的定量原理：
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擴(kuò)增曲線
在Real-time qPCR中，對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
實(shí)驗(yàn)注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于液中。
PCR檢測試劑盒：
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
弗氏志賀菌分類學(xué)研究模式菌株: no食物，水提供形式: 凍干物安全等級: 2培養(yǎng)基: 2生長條件: 37℃

曲霉屬活性物質(zhì)；退行性疾病模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0014生長條件: 28C

弧菌致病微生物/日本對蝦弧菌病致病菌模式菌株: no生物樣/日本對蝦提供形式: 凍干物安全等級: 2培養(yǎng)基: 471生長條件: 36℃

球孢白僵菌生長條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

氧化鐵鉤端螺菌生物浸礦模式菌株: no礦山性水中提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 718生長條件: 30℃

 -224℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

#固氮菌益生菌模式菌株: no莖提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 141生長條件: 32

微桿菌屬有機(jī)化工廢水處理。模式菌株: no化工污水提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0841生長條件: 30℃

猴頭菇培養(yǎng)基: CM0017用于食用菌。提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 25℃ 礦物油法

副豬嗜血桿菌生長條件: 37培養(yǎng)基: 183提供形式: 凍干物安全等級: 2模式菌株: no 真空冷凍干燥法;

白色假絲酵母菌培養(yǎng)基: CM0013模式菌株: no痰提供形式: 凍干物安全等級: 2生長條件: 36℃ -80℃冰箱凍結(jié)法

新城疫病實(shí)驗(yàn)研究其生物學(xué)活性，并進(jìn)一步從基因水平上進(jìn)行分析。同時，篩選合適的疫苗株制備新型疫苗。模式菌株: no病雞提供形式: 凍結(jié)物安全等級: 2培養(yǎng)基: 0生長條件: 37

 -225℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

蜜蜂生球擬酵母培養(yǎng)基: CM0375以玉米為原料發(fā)酵甘油。提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28-30℃ 定期移植法

諾卡氏菌屬菌種降血脂模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0027生長條件: 28C

海綿假單胞菌1.海洋石油污染生物修復(fù); 2.生物活性物質(zhì)篩選模式菌株: no水樣/下層海水提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 821生長條件: 25℃

BairdParkerAgarMedium

M湯(MHB) 250(g) incubation media M湯(MHB) 250(g)

四硫磺鈉亮綠增菌液 2X5支 含液2ml/支和煌綠1ml/支，2支添加于100mL(023031)中配成TTB

溴化十六烷基三瓊脂培養(yǎng)基CetrimideAgarMedium綠膿假單胞菌的分離培養(yǎng)

改良磷鹽緩沖液PSB 250g 小腸結(jié)腸炎耶爾森氏菌增菌培養(yǎng)

NZYM瓊脂  NZYM Agar  100克  BR

NZYM肉湯  NZYM Broth  100克  BR

NZM瓊脂  NZM Agar  100克  BR

NZM肉湯  NZM Broth  100克  BR
乙型流感病毒(IBV)核酸檢測試劑盒MLCB寒天培地顆粒規(guī)格：250g用途：用于沙門氏菌分離培養(yǎng)

XLT4瓊脂規(guī)格：250g用途：用于食品中致病菌，特別是沙門氏菌分離培養(yǎng)

BCYE-CYS瓊脂基礎(chǔ)規(guī)格：100g用途：用于軍團(tuán)菌的選擇性分離培養(yǎng)(ISO標(biāo)準(zhǔn))

酪蛋白葡萄糖肉湯規(guī)格：250g用途：用于霉菌、酵母菌等的增菌培養(yǎng)

酵母浸粉規(guī)格：250g用途：培養(yǎng)基原材料，提供細(xì)菌生長所需的維生素B族

鳥氨脫羧酶肉湯規(guī)格：1ml*20用途：用于生化鑒定