當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>核酸檢測試劑盒>>熒光PCR法>> 50T禽腺病毒(FADV)核酸定性檢測試劑盒
參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:禽腺病毒(FADV)核酸定性檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品貨號:FS-P10616
產(chǎn)品分類:熒光PCR法
產(chǎn)品運(yùn)輸:低溫運(yùn)輸
儲(chǔ)存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運(yùn)輸:低溫、避光,快遞免費(fèi)送貨上門。
產(chǎn)品特點(diǎn):
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計(jì)引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。
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實(shí)驗(yàn)過程:
一、試劑準(zhǔn)備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物??梢允荄NA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此,擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴(kuò)增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR:
實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點(diǎn)檢測的局限,實(shí)現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強(qiáng)度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個(gè)樣品Ct值的計(jì)算,根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線獲得定量結(jié)果。因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR無需內(nèi)標(biāo)是建立在兩個(gè)基礎(chǔ)之上的:
1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達(dá)Ct值所在的循環(huán)數(shù)時(shí),剛剛進(jìn)入真正的指數(shù)擴(kuò)增期(對數(shù)期),此時(shí)微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性,即同一模板不同時(shí)間擴(kuò)增或同一時(shí)間不同管內(nèi)擴(kuò)增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知樣品進(jìn)行定量測定,因此,實(shí)時(shí)熒光定量PCR是一種采用外標(biāo)準(zhǔn)曲線定量的方法。
外標(biāo)準(zhǔn)曲線的定量方法相比內(nèi)標(biāo)法是一種準(zhǔn)確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標(biāo)準(zhǔn)曲線的實(shí)時(shí)熒光定量PCR是迄今為止定量最準(zhǔn)確,重現(xiàn)性*定量方法,已得到的*,廣泛用于基因表達(dá)研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個(gè)新內(nèi)切位點(diǎn)的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時(shí)擴(kuò)增(其中一個(gè)引物為熒光標(biāo)記)。擴(kuò)增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個(gè)片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強(qiáng)度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標(biāo)和引物,內(nèi)標(biāo)用基因工程方法合成。上游引物用熒光標(biāo)記,下游引物不標(biāo)記。在模板擴(kuò)增的同時(shí),內(nèi)標(biāo)也被擴(kuò)增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標(biāo)與靶模板的長度不同,二者的擴(kuò)增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強(qiáng)度,以內(nèi)標(biāo)為對照定量待檢測模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等標(biāo)記引物,擴(kuò)增產(chǎn)物被固相板上特異的探針?biāo)Y(jié)合,再加入抗di高辛或生物素酶標(biāo)抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實(shí)驗(yàn),若加入內(nèi)標(biāo),作出標(biāo)準(zhǔn)曲線,也可實(shí)現(xiàn)定量檢測目的。
壯觀鏈霉菌培養(yǎng)基: CM0012產(chǎn)生Spectinomycin大觀霉素提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28C 真空冷凍干燥
-916℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
海桿菌潛在的有機(jī)污染物降解菌/分離自PAHs富集菌群模式菌株: no沉積物/近海沉積物提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 1001生長條件: 28℃
釀酒酵母生長條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0013提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
釀酒酵母生長條件: 25-28℃培養(yǎng)基: CM0077提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法
乳乳球菌乳亞種發(fā)酵奶、奶酪等乳制品模式菌株: no原料乳提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0842生長條件: 30℃
谷氨棒桿菌土壤微生物資源調(diào)查及分類學(xué)研究模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 312生長條件: 28℃
硬柄小囊菌生長條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0013提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
-917℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
刺盤孢培養(yǎng)基: 0014模式菌株: no植物提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 25℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
干草鞘氨醇單胞菌生長條件: 4℃培養(yǎng)基: 848土壤提供形式: 凍干物模式菌株: no 真空冷凍干燥法
釀酒酵母培養(yǎng)基: CM0077酒精。提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28℃ 真空冷凍干燥法
花津?yàn)┭挎邨U菌分解卵磷脂模式菌株: no泥樣提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 0223生長條件: 30℃
畢赤酵母屬培養(yǎng)基: CM0181;酵母菌培養(yǎng)基(YeastCultureMedium);酵母膏3.0g,麥芽浸膏3.0g,蛋白胨5.0g,葡萄糖10.0g,瓊脂20.0g,蒸餾水1.0L。模式菌株: yes昆蟲提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 25℃;好氧 -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
#ST0-2(大球蓋菇)生長條件: 25培養(yǎng)基: 14提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no 定期移植法
-918℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
1-十六烷基-3-甲基咪唑六磷鹽 3-(硫基)丙 2-溴-5-
5-溴-2-甲基 4-基安替比林 5-溴-2--
3-吡唑烷基氫氧 2-甲基噻吩 2-溴-5-
2-基-3,5-二 2-噻吩 4-溴-2-
Diethylstilbestrol 己烯雌酚 56-53-1
DIENESTROL 雙烯雌酚 84-17-3
Bromine 溴水 7726-95-6
ESCHKA'S MIXTURE 依斯卡合劑 2230788
大鼠脂肪合酶(FASN)ELISA試劑盒 ,英文名: FASN ELISA Kit
Mouse soluble tumor necrosis factor related apoptosis inducing ligand (sAIL) ELISA Kit 小鼠可溶性腫瘤壞死因子相關(guān)凋亡誘導(dǎo)配體(sAIL)ELISA試劑盒
MouseInsulin-likegrowthfactorbindingprotein1,IGFBP-1ELISAKit 小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白1(IGFBP-1)ELISA試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforHumanHaptoglobin,Hpt/HPELISAKIT人結(jié)合珠蛋白/觸珠蛋白規(guī)格:48T/96T
維生素E比色法定量檢測試劑盒20次
ELISAKitbFGF-6大鼠堿性成纖維生長因子6規(guī)格:48T/96T
禽腺病毒(FADV)核酸定性檢測試劑盒異夏佛塔苷52012-29-0中文別名:芹菜素-6-阿拉伯糖-8-葡萄糖苷
英文名:Isoshaftoside
英文別名:apigenin-6-α-L-arabinosyl-8-β-glucoside
登錄號:52012-29-0
分子式:C26H28O14
分子量:564.49
分子結(jié)構(gòu):
外觀:白色粉末
規(guī)格:20mg/支
純度:HPLC≥98%
用途:用于藥理實(shí)驗(yàn)、含量測定和定性。
提取來源:豆科相思子屬植物雞骨草Abrus cantoniensis,毛雞骨草A. mollis
溶解性:溶于
藥理藥效:可能有治療肝炎的作用
低溫避光
貯存條件: 4℃冷藏、密封、避光
有效期: 2年
PCR的反應(yīng)條件:
因擴(kuò)增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴(kuò)增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴(kuò)增片段的大小,設(shè)定25~30個(gè)循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少,擴(kuò)增量不足;如果循環(huán)次數(shù)太多,則會(huì)出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預(yù)備實(shí)驗(yàn)可2℃間隔進(jìn)行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進(jìn)行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時(shí),每kbp大體可設(shè)定30秒~1分鐘;當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時(shí), 時(shí)間設(shè)定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時(shí)會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物;Anneal溫度太低時(shí),容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外,Extension時(shí)間太短時(shí),會(huì)得不到擴(kuò)增產(chǎn)物或者會(huì)有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成;而Extension時(shí)間太長時(shí),會(huì)出現(xiàn)Smear。
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