當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>核酸檢測試劑盒>>熒光PCR法>> 50T禽腦脊髓炎病毒(AEV)核酸檢測試劑盒
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱 | 分類 | 貨號 |
禽腦脊髓炎病毒(AEV)核酸檢測試劑盒 | 熒光-PCR法 | FS-P10264 |
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
PCR技術(shù)的定量原理:?
擴(kuò)增曲線
在Real-time qPCR中,對整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系,所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號積累實(shí)時(shí)監(jiān)測整個(gè)PCR進(jìn)程,通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
畢赤酵母屬培養(yǎng)基: CM0013用于飼料。提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 25-28℃ 真空冷凍干燥法
球孢白僵菌生長條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no
DSM43846=ATCC33205=IFO14230=JCM3312=KCCA-0312=NBRC14230模式菌株: yes安全等級: 1種屬: Thermoactinomyces│intermidus空調(diào)過濾器提供形式: 凍干物培養(yǎng)基: CM1005生長條件: 55℃
埃及曲霉培養(yǎng)基: 0015模式菌株: no人參提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 25-28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
射紋多孔菌生長條件: 25培養(yǎng)基: 14提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no 定期移植法
ATCC15829=BCRC12120=CCUG23849=CIP104324=DSM20166=KCTC9228=LMG16344=NBRC12675=NRRLB-24232模式菌株: yes安全等級: 1種屬: Microbacterium testaceumChinese paddy提供形式: 凍干物Type strain培養(yǎng)基: 營養(yǎng)肉汁瓊脂: 3.0g,蛋白胨 10.0g,NaCl 5.0g,瓊脂 15.0g,蒸餾水 1.0L,pH7.0。
-215℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
米曲霉釀造醬油,還可以蛋白酶、淀粉酶模式菌株: no釀造基物提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 14生長條件: 28℃
DSM24164=BCRC80272模式菌株: yes安全等級: 1種屬: Sphingomonas│formosensis易北河河水提供形式: 凍干物降解萘、菲和芘。培養(yǎng)基: CM0847
枯草芽孢桿菌培養(yǎng)基: CM0003模式菌株: no紫蘇子提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 35-37℃ -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
釀酒酵母釀造果酒。模式菌株: no果酒干酵母提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0077生長條件: 28-30℃
大腸埃希菌科研及血清定型模式菌株: no病料提供形式: 凍干物安全等級: 2培養(yǎng)基: 335生長條件: 37
球孢白僵菌生長條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no
-216℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
克雷伯氏菌培養(yǎng)基: 206模式菌株: no土樣提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 50℃ -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;其他
乳乳球菌研究分析模式菌株: no乳汁提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 55生長條件: 37
產(chǎn)芽孢肉湯250g產(chǎn)氣莢膜梭菌的產(chǎn)芽孢培養(yǎng)(SN標(biāo)準(zhǔn))
MI培養(yǎng)基 MI Medium 濾膜法計(jì)數(shù)飲用水中大腸埃希氏菌和大腸菌群
堿性L-G培養(yǎng)基基礎(chǔ) Alkaline L-G medium Base 250 適性物質(zhì)處理的結(jié)核桿菌標(biāo)本
Wort肉湯基礎(chǔ)250g/瓶麥芽汁肉湯基礎(chǔ),真菌,特別是酵母菌的增菌培養(yǎng),每培養(yǎng)基中添加0.25g2incubationmediaWort肉湯基礎(chǔ)250g/瓶麥芽汁肉湯基礎(chǔ),真菌,特別是酵母菌的增菌培養(yǎng),每培養(yǎng)基中添加0.25g21702
2216EAgar
血瓊脂平板 Blood Agar Plate 50塊 營養(yǎng)需求較高的細(xì)菌培養(yǎng)
SS瓊脂平板 SS Agar Plate 10塊 沙門菌屬和志賀菌屬細(xì)菌的分離培養(yǎng)
伊紅美蘭瓊脂平板 EMB Agar Plate 10塊 腸道革蘭氏陰性菌的分離培養(yǎng)
中國藍(lán)瓊脂平板 China Blue Agar Plate 10塊
禽腦脊髓炎病毒(AEV)核酸檢測試劑盒山梨醇麥康凱瓊脂添加劑規(guī)格:1ml/支*5用途:每200ml HB0121培養(yǎng)基中添加1支(含頭孢克肟0.01mg和亞碲鉀0.5mg) 配10盒
RS培養(yǎng)基規(guī)格:100g用途:用于致病性嗜水氣單胞菌的選擇性分離培養(yǎng)(GB標(biāo)準(zhǔn))
BCYE-Cys瓊脂基礎(chǔ)規(guī)格:可溶性焦磷鐵用途:0.025g每支含量
含0.6%酵母浸膏的胰酪胨大豆瓊脂(TSA-YE)顆粒規(guī)格:250g用途:用于單增李氏菌的分純,培養(yǎng),可用于做7%羊血瓊脂
蔗糖胰蛋白胨肉湯規(guī)格:250g用途:用于致病性嗜水氣單胞菌酶聯(lián)免疫試驗(yàn)
刃天青規(guī)格:1g用途:微生物指示劑
PCR檢測試劑盒:
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中,按100g:3ml的比例加入Trizol試劑,嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol(按3ml/100mg組織,寧多勿少)置于玻璃勻漿器中勻漿后,冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中,4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中,室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol,振蕩15s,室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相,移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol,振搖,置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min,EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清,紙巾吸干,加入75%乙醇1ml,振搖,充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇,空氣干燥10min(可離心加快干燥,盡量吸盡離心液體)。
(12)半透明時(shí)將RNA溶于去核酸酶的水20ul中(可吹打混勻),-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度,所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳,顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
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