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貨號 | FS-X10792 |
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中文名稱:CDK9抑制劑(LDC000067)
英文名稱:LDC000067
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|10mg|50mg
貨號:FS-X10792
產(chǎn)品介紹:
LDC000067是高度選擇性的CDK9抑制劑,體外實驗的IC50值為44±10nM。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:1073485-20-7 別名:LDC067 純度:98.14% 分子量:370.43 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
地衣芽孢桿菌小鼠小扁豆結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體3Anti-MINK1 Antibody人去甲腎上腺(NA)
辣椒溶桿菌人淋巴βAnti-MINK1 Antibody人去甲腎上腺(NA)
普通變形桿菌大鼠胞漿型磷脂A2Anti-MINPP1 Antibody人前列腺F(PGF)
栗疫菌人淋巴αAnti-MINPP1 Antibody人前列腺F(PGF)
膠孢魚類狀腺原Anti-MKI67 Antibody人前列腺E1(PGE1)
Sphingobium francense兔胰淀Anti-MKI67 Antibody人前列腺E1(PGE1)
奇異酵母小鼠小扁豆結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體2Anti-MKNK2 Antibody人內(nèi)皮1(ET-1)
瘤孢梭孢殼大鼠Ⅰ型膠原交聯(lián)羧基末端肽Anti-MKNK1 Antibody人內(nèi)皮1(ET-1)
長枝木霉大鼠肌鈣蛋白TAnti-MKNK1 Antibody人促卵泡(FSH)
蠟葉曲霉兔心肌肌鈣蛋白ⅠAnti-MLF1 Antibody人促卵泡(FSH)
南方樹舌小鼠小扁豆結(jié)合型甲胎蛋白/甲胎蛋白異質(zhì)體1Anti-MLST8 Antibody人游離β絨毛膜促性腺激(f-βhCG)
深褐褶菌人CC趨化因子受體1Anti-MLANA Antibody人游離β絨毛膜促性腺激(f-βhCG)
大腸埃希菌魚類皮質(zhì)Anti-MLNR Antibody人大內(nèi)皮(Big ET)
秀珍菇大鼠CD8分子Anti-MMP19 Antibody人大內(nèi)皮(Big ET)
雞腿7號人CX3C趨化因子受體1Anti-MMP27 Antibody人全段甲狀旁腺(i-PTH)
不吸水鏈霉菌魚類超敏C反應蛋白Anti-MMP19 Antibody人全段甲狀旁腺(i-PTH)
視網(wǎng)膜色上皮細胞特異性蛋白65抗體里拉微球菌人甲狀腺癌細胞Hth83(干細胞庫保藏)
RhoB蛋白抗體異常漢遜酵母人子宮頸表皮癌細胞(2014年9月新引進)(干細胞庫保藏)
松弛3抗體橘青霉人胰腺癌細胞(2013年新引進)(干細胞庫保藏)
Kartagener綜合征相關蛋白RSHL3抗體林業(yè)微生物菌種人膀胱移行細胞癌細胞(2013年新引進)(干細胞庫保藏)
CDK9抑制劑(LDC000067)薛瓦酵母 胰蛋白胨葡萄糖酵母浸膏肉湯(TGPY)乳房鏈球
擬青霉 1,2-雙(二甲基瞵)乙烷β干擾
亞螺毛殼 厭氧卵黃瓊脂基礎白介36α
熒光假單胞 ATCC培養(yǎng)基:2693改良Dixon(mDixon)白介13
褐環(huán)粘蓋牛肝 UBA培養(yǎng)基饑餓
昆明新鞘氨 BF839計數(shù)選擇培養(yǎng)基β血小板球蛋白;β血栓環(huán)蛋白
毛紫褐鏈霉 2-氟-6-(三氟甲基)溴芐血管內(nèi)皮生長因子A
蘇云金芽孢桿松蠋亞種 M-Endo肉湯血小板激活因子乙酰水解
毛柄(金針菇) D-甘露發(fā)酵管(枯草芽孢桿)磷脂A2
擬青霉 N-Boc-N'-Cbz-L-賴可溶性CD14分子
異配囊接霉 鹽(枯草芽孢桿)脂肪型脂肪結(jié)合蛋白
腸桿屬 馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)分泌型卷曲相關蛋白5
植物乳桿植物亞種 CCFA瓊脂基礎磷化AKT蛋白
廣島鏈霉 大豆胰酪蛋白胨肉湯(含亞硫鐵)磷脂酰肌三羥基激
季也蒙假絲酵母 2-甲氧基茴香硫載脂蛋白E
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