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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>核酸檢測(cè)試劑盒>>熒光PCR法>> 50T豬多殺性巴氏桿菌(SPA)核酸檢測(cè)試劑盒
對(duì)蝦黃頭病病毒(YHV)核酸定性檢測(cè)試劑盒
服務(wù)流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
產(chǎn)品名稱(chēng) | 分類(lèi) | 貨號(hào) |
豬多殺性巴氏桿菌(SPA)核酸檢測(cè)試劑盒 | 熒光-PCR法 | FS-P10290 |
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對(duì)原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性;
④靶基因的特異性與保守性。
PCR技術(shù)的定量原理:
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擴(kuò)增曲線
在Real-time qPCR中,對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào),隨著反應(yīng)的進(jìn)行,監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線,即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期,擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋,無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化,此時(shí)即為基線期。
PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板,從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期,擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線性關(guān)系,所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng):
1)RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào);
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于液中。
實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi),探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加,非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量(包括定量和相對(duì)定量)和定性分析。主要服務(wù):DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。
-237℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
2453O1/eltor 稻葉(Inaba)模式菌株: no種屬: Vibrio│cholerae O1提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: CM0116生長(zhǎng)條件: 37℃
德巴利酵母生長(zhǎng)條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 13泥土提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no 真空冷凍干燥法
百日咳博德特氏菌生長(zhǎng)條件: 37℃培養(yǎng)基: CM0119提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2模式菌株: no 真空冷凍干燥法
ATCC05595=DSM7136培養(yǎng)基: 0002模式菌株: no種屬: Pseudomonas│stutzeri提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 30℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
釀酒酵母培養(yǎng)基: CM0013制酒精。提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 25-28℃ 真空冷凍干燥法
南海海棲菌培養(yǎng)基: 471產(chǎn)酶微生物/產(chǎn)脂肪酶菌株沉積物/深海沉積物提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 25℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
-238℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
地衣芽孢桿菌培養(yǎng)基: 33模式菌株: no土樣提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 50℃ -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法;其他
鏈霉菌培養(yǎng)基: 12模式菌株: no表面土壤提供形式: 其他安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 28℃ 其他
土星擬威爾酵母土星變種培養(yǎng)基: 0013模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 25℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
產(chǎn)堿假單胞菌生長(zhǎng)條件: 30℃培養(yǎng)基: 0002提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
辣椒疫霉培養(yǎng)基: 14模式菌株: no辣椒提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 25-30 定期移植法
小孢根霉華變種生長(zhǎng)條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
-239℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
金黃色葡萄球菌生長(zhǎng)條件: 37℃培養(yǎng)基: O525提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: yes 定期移植法
皰肉牛肉粒加入皰肉基礎(chǔ),配成皰肉培養(yǎng)基
MFB培養(yǎng)基 MFB Medium 李斯特氏菌的選擇性增菌培養(yǎng)
慶大霉素瓊脂 Gentamycin Agar 250克 霍亂弧菌的分離培養(yǎng)
霉菌和酵母菌顯色培養(yǎng)基l霉菌和酵母菌的顯色培養(yǎng)incubationmedia霉菌和酵母菌顯色培養(yǎng)基l霉菌和酵母菌的顯色培養(yǎng)
乙基紫疊氮鈉肉湯(litsky肉湯) 250g 鏈球菌增菌培養(yǎng)
李斯特氏菌顯色培養(yǎng)基配套平皿 Listera Chromogenic Medium Dish 9㎝/塊
金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基 Staphylococcus Chromogenic Medium 1升 金黃色葡萄球菌的顯色培養(yǎng)
金黃色葡萄球菌顯色培養(yǎng)基配套平皿 Staphylococcus Chromogenic Medium Dish 9㎝/塊
霉菌和酵母菌顯色培養(yǎng)基配套平皿 Mould And Yeast Chromogenic Medium Dish 9㎝/塊
豬多殺性巴氏桿菌(SPA)核酸檢測(cè)試劑盒美羅培南藥敏紙片規(guī)格:10μg/片,20片/瓶用途:用于抗菌藥體外敏感試驗(yàn)。
甘露醇卵黃多粘菌素瓊脂基礎(chǔ)(MYP)規(guī)格:多粘菌素B用途:5ml
頭孢曲松藥敏紙片 別名:頭孢三嗪規(guī)格:30ug/片,20片/瓶用途:用于藥物體外敏感性試驗(yàn)
梭菌增菌對(duì)照培養(yǎng)基規(guī)格:3.8g/100ml/袋用途:培養(yǎng)基適用性實(shí)驗(yàn)
維生素K1規(guī)格:1ml用途:添加于PYG液體培養(yǎng)基基礎(chǔ)
木糖-明膠規(guī)格:20支用途:用于蠟樣芽孢桿菌明膠液化試驗(yàn)
PCR檢測(cè)試劑盒:
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中,按100g:3ml的比例加入Trizol試劑,嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol(按3ml/100mg組織,寧多勿少)置于玻璃勻漿器中勻漿后,冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中,4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中,室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol,振蕩15s,室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相,移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol,振搖,置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min,EP管底部可見(jiàn)白色沉淀物。
(9)棄上清,紙巾吸干,加入75%乙醇1ml,振搖,充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇,空氣干燥10min(可離心加快干燥,盡量吸盡離心液體)。
(12)半透明時(shí)將RNA溶于去核酸酶的水20ul中(可吹打混勻),-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度,所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳,顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
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