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貨號 | FS-X10623 |
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中文名稱:小分子Sirtuin1激活劑
英文名稱:SRT 2104
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
貨號:FS-X10623
產(chǎn)品介紹:
SRT2104是小分子Sirtuin1激活劑。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:1093403-33-8 純度:99.60% 分子量:516.64 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大小; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
釀酒酵母PE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗小鼠IgGAnti-SMAD4 Antibody冠蛋白1B(CORO1B)
產(chǎn)阿拉伯糖漢遜酵母生物標(biāo)記的羊抗小鼠IgMAnti-SMAD6 Antibody冠蛋白1A(CORO1A)
釀酒酵母辣根過氧化物標(biāo)記的羊抗小鼠IgMAnti-SMAD5 Antibody寡糖轉(zhuǎn)移4(OST4)
大腸埃希氏菌羅丹明標(biāo)記的羊抗小鼠IgMAnti-SMAD5 Antibody寡膈蛋白1(OPHN1)
戴爾根霉FITC標(biāo)記的羊抗小鼠IgMAnti-SMAD6 Antibody胍基丁脲水解(AGMAT)
豇豆慢生根瘤菌Alexa Fluor 350標(biāo)記的羊抗小鼠IgMAnti-SMARCA2 Antibody鈷傳遞蛋白Ⅱ(TCN2)
復(fù)輪生小克銀漢霉Cy3標(biāo)記的羊抗小鼠IgMAnti-SMAD9 Antibody骨形成蛋白6(BMP6)
馬鏈球菌馬亞種Cy5標(biāo)記的羊抗小鼠IgMAnti-SMC3 Antibody(PB0789)骨形成蛋白1(BMP1)
大腸埃希氏菌Cy5.5標(biāo)記的羊抗小鼠IgMAnti-SMARCAD1 Antibody骨調(diào)蛋白(OMD)
變幻青霉Cy7標(biāo)記的羊抗小鼠IgMAnti-SMARCA4 Antibody骨髓基質(zhì)抗原2(BST2)
腸桿菌屬Alexa Fluor 647標(biāo)記的羊抗小鼠IgMAnti-SMC4 Antibody骨髓基質(zhì)抗原1(BST1)
枯草芽孢桿菌膠體金標(biāo)記的羊抗小鼠IgMAnti-SMN1/2 Antibody骨肉瘤放大基因9(OS9)
鉤狀木霉堿性磷(AP)標(biāo)記的羊抗大鼠IgGAnti-SMOX Antibody骨膜蛋白(POSTN)
假單胞菌膠體金標(biāo)記的羊抗大鼠IgGAnti-SMC6 Antibody骨骼肌特異性受體酪激(MUSK)
*櫻桃鏈格孢FITC標(biāo)記的羊抗大鼠IgGAnti-SMTN Antibody骨骼肌慢肌肌鈣蛋白T(TNNT1)
紅硬囊果青霉辣根過氧化物標(biāo)記的羊抗大鼠IgGAnti-SMURF1 Antibody骨骼肌慢肌肌鈣蛋白I(TNNI1)
谷受體3A抗體類高加索奶乳桿菌大鼠腎成纖維細(xì)胞提取物
谷受體3B抗體谷棒桿菌Ⅰ型大鼠腎足突細(xì)胞提取物
谷受體3A+3B抗體費比恩畢赤酵母大鼠胎兒表皮角質(zhì)形成層細(xì)胞提取物
神經(jīng)元引導(dǎo)蛋白3抗體乙酰短桿菌大鼠皮下脂肪細(xì)胞提取物
小分子Sirtuin1激活劑粘膜鞘氨單胞 3,5-二溴苯戊型肝炎病IgM抗體
豬鏈球分型血清參考品 血清型 SS19 3',3'',5',5''-四溴乙酯血紅蛋白
孟氏假單胞 5(6)-羧基熒光琥珀酰亞酯血管內(nèi)皮生長因子
Leucobacter kyeonggiensis 3--4-氟苯甲低密度脂蛋白
Nocardioides simplex 2',7'-二-(2-羧乙基)-5(6)-羧基熒光乙酰甲酯高密度脂蛋白
球孢枝孢 Fmoc-Ala-OH-15N鈣蛋白抑制蛋白
平菇 Fmoc-環(huán)亮組織蛋白B
萎蔫短小桿 BOC-L-3-(3-吡啶基)-組織蛋白L
蓋替隱球酵母 Fmoc-Thr(tBu)-OPfp泰勒蟲
空泡單胞 BOC-L-苯甘氨焦蟲
環(huán)形凸臍蠕孢 2,5-二溴-3-己基噻吩傳染性支氣管炎
枯草芽孢桿 4-(芴甲氧羰基氨基)丁傳染性動脈炎
葡萄座腔 雙(2,4,6-三)草酯肌紅蛋白
無二檸檬桿 N-Boc-3-甲鼻疽伯克霍德抗體
傳染性支氣管炎病 全反式視黃5羥色
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