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貨號 | FS-X10659 |
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中文名稱:小分子PKM2激動劑(DASA-58)
英文名稱:DASA-58
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg
貨號:FS-X10659
產(chǎn)品介紹:
DASA-58是一種高度特異的小分子PKM2激動劑,DASA-58抑制LPS誘導的HIF-1α和IL-1β,以及一系列其它Hif-1α依賴基因的表達。 注:本品僅可用于科研實驗,嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:1203494-49-8 純度:98.01% 分子量:453.53 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
實驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min; 2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜; 5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細胞100μL/孔,通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞,細胞毒性實驗每孔加入100微升5000~10000個細胞(具體每孔所用的細胞的數(shù)目,需根據(jù)細胞的大小,細胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結果分析
a、細胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細胞),各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細胞的OD 值,C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =(加藥細胞OD/對照細胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
釀酒酵母Cy5標記的兔抗小鼠k鏈Anti-VTN Antibody(PB0482)蛋白C10(C10)
黑曲霉Cy5.5標記的兔抗小鼠k鏈Anti-VWF Antibody(PB0273)蛋白C(PROC)
圈卷產(chǎn)色鏈霉菌Cy7標記的兔抗小鼠k鏈Anti-VWF Antibody(PB0086)蛋腺轉(zhuǎn)移Ⅱα(MAT2α)
白乳菇PE-Cy7標記的兔抗小鼠k鏈Anti-WAS Antibody(PB0483)彈性蛋白微原纖維界面因子2(EMILIN2)
弗雷德里克斯堡假單胞菌Alexa Fluor 555標記的兔抗小鼠k鏈Anti-WDR1 Antibody彈性蛋白微原纖維界面因子1(EMILIN1)
蘋果鏈格孢APC標記的兔抗小鼠k鏈Anti-WAC Antibody彈性蛋白4(ELA4)
土壤貪噬菌Alexa Fluor 350標記的兔抗小鼠k鏈Anti-WEE1 Antibody彈性蛋白3B(ELA3B)
薔薇生鏈格孢PE-Cy3標記的兔抗小鼠k鏈Anti-WDR83 Antibody彈性蛋白3A(ELA3A)
芥黃蜜環(huán)菌Cy7標記的兔抗大鼠IgGAnti-WEE1 Antibody彈性蛋白2B(ELA2B)
粗壯假絲酵母PE-Cy3標記的兔抗大鼠IgGAnti-WFDC2 Antibody彈性蛋白(ELA)
枯草芽孢桿菌PE-CY5標記的兔抗大鼠IgGAnti-WFDC2 Antibody膽鹽依賴性脂肪(BSDL)
假單胞菌APC標記的兔抗大鼠IgGAnti-WFDC2 Antibody膽囊收縮八肽(CCK8)
解淀粉鹽顆粒形菌Alexa Fluor 555標記的兔抗大鼠IgGAnti-WNT1 Antibody膽囊收縮B受體(CCKBR)
三隔鐮刀菌Alexa Fluor 647標記的兔抗大鼠IgGAnti-WISP1 Antibody膽囊收縮A受體(CCKAR)
釀酒酵母PE-Cy5.5標記的兔抗大鼠IgGAnti-WNT10A Antibody膽綠還原B(BLVRB)
玫煙色棒束孢Cy3標記的兔抗大鼠IgGAnti-WNT1 Antibody膽綠還原A(BLVRA)
前列腺癌相關蛋白2抗體里氏木霉小鼠腎動脈組織提取物
細胞表面受體PILRβ抗體梨形毛霉小鼠前列腺組織提取物
絲蛋白10抗體粉紅寄生菌小鼠膀胱組織提取物
性磷抗體短密青霉小鼠腎小球組織提取物
小分子PKM2激動劑(DASA-58)微小根毛霉 對苯乙酮糖化蛋白
大腸埃希氏桿 4-溴苯乙酮天門冬氨基轉(zhuǎn)移
德氏乳桿保加利亞亞種 對異基苯透明質(zhì)
榛色假單胞 三乙氧基硅烷脫氧吡啶;脫氧吡啶啉
芽孢桿屬 3-(Boc-氨基)吡咯烷晚期糖基化終末產(chǎn)物
動球 4-甲酯基苯維生D結合蛋白
毛霉屬 1-芐基-3-(Boc-氨基)吡咯烷色P4502E1
變異鏈球 草酰二肼心肌特異性肌鈣蛋白T
多形布勒擔子酵母 4-硝基鄰苯二鋅金屬硫蛋白
香菇 三乙基硅烷血管內(nèi)皮生長因子
溶淀粉類芽孢桿 2--3′,4′-二羥基苯乙酮血管生長
紫黑杜搟氏 (S)-4-苯基-2-惡唑烷酮血管性血友病因子
緋紅密孔 疊氮化四丁基血清淀粉樣蛋白A
爪哇根霉 5-氨基間苯二甲血小板活化因子
謝瓦氏曲霉 1,3,5-金剛烷三血小板源性生長因子
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