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參數(shù)規(guī)格:
產(chǎn)品名稱:人溶菌酶(hLYZ)轉(zhuǎn)基因成分核酸檢測試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格:50T
產(chǎn)品貨號:FS-P10551
產(chǎn)品分類:熒光PCR法
產(chǎn)品運輸:低溫運輸
儲存條件:-20℃避光保存,避免反復(fù)凍融。
運輸:低溫、避光,快遞免費送貨上門。
產(chǎn)品特點:
本產(chǎn)品就是根據(jù)保守區(qū)設(shè)計引物而開發(fā)的高靈敏 PCR檢測試劑盒 。?
實驗過程:
一、試劑準備
1. DNA模板
2.對應(yīng)目的基因的特異引物(在PCR反應(yīng)中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制,而不能從無到有,憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計。因此,擴增不同的基因需要設(shè)計不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步驟
1.在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2.調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,zui后在72℃ 保溫7min。
3.結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4.PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μlLuFang進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
實時熒光定量PCR:
實時熒光定量PCR技術(shù)有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限,實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度,并記錄在電腦軟件之中,通過對每個樣品Ct值的計算,根據(jù)標準曲線獲得定量結(jié)果。因此,實時熒光定量PCR無需內(nèi)標是建立在兩個基礎(chǔ)之上的:
1)Ct值的重現(xiàn)性PCR循環(huán)在到達Ct值所在的循環(huán)數(shù)時,剛剛進入真正的指數(shù)擴增期(對數(shù)期),此時微小誤差尚未放大,因此Ct值的重現(xiàn)性,即同一模板不同時間擴增或同一時間不同管內(nèi)擴增,得到的Ct值是恒定的。
2)Ct值與起始模板的線性關(guān)系由于Ct值與起始模板的對數(shù)存在線性關(guān)系,可利用標準曲線對未知樣品進行定量測定,因此,實時熒光定量PCR是一種采用外標準曲線定量的方法。
外標準曲線的定量方法相比內(nèi)標法是一種準確的、值得信賴的科學(xué)方法。利用外標準曲線的實時熒光定量PCR是迄今為止定量最準確,重現(xiàn)性*定量方法,已得到的*,廣泛用于基因表達研究、轉(zhuǎn)基因研究,藥物療效考核、病原體檢測等諸多領(lǐng)域。
定量PCR方法:
a、競爭法
選擇由突變克隆產(chǎn)生的含有一個新內(nèi)切位點的外源競爭性模板。在同一反應(yīng)管中,待測樣品與競爭模板用同一對引物同時擴增(其中一個引物為熒光標記)。擴增后用內(nèi)切酶消化PCR產(chǎn)物,競爭性模板的產(chǎn)物被酶解為兩個片段,而待測模板不被酶切,可通過電泳或高效液相將兩種產(chǎn)物分開,分別測定熒光強度,根據(jù)已知模板推測未知模板的起始拷貝數(shù)。
b、內(nèi)參照法
在不同的PCR反應(yīng)管中加入已定量的內(nèi)標和引物,內(nèi)標用基因工程方法合成。上游引物用熒光標記,下游引物不標記。在模板擴增的同時,內(nèi)標也被擴增。在PCR產(chǎn)物中,由于內(nèi)標與靶模板的長度不同,二者的擴增產(chǎn)物可用電泳或高效液相分離開來,分別測定其熒光強度,以內(nèi)標為對照定量待檢測模板。
c、PCR-ELISA法
利用di高辛或生物素等標記引物,擴增產(chǎn)物被固相板上特異的探針所結(jié)合,再加入抗di高辛或生物素酶標抗體-辣根過氧化物酶結(jié)合物,最終酶使底物顯色。常規(guī)的PCR-ELISA法只是定性實驗,若加入內(nèi)標,作出標準曲線,也可實現(xiàn)定量檢測目的。
球形芽孢桿菌用于污水處理研究模式菌株: no馴化活性污泥提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0002生長條件: 37℃
-884℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
彎曲芽胞桿菌分類、研究,可以用來生物肥料。模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 0065生長條件: 28℃
鏈霉菌屬菌種抗耐藥細菌模式菌株: no海底淤泥提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0014生長條件: 28C
抗輻射不動桿菌培養(yǎng)基: 0002模式菌株: no肥料提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1生長條件: 30℃ -80℃冰箱凍結(jié)法
AS3.2762抑菌試驗?zāi)J骄? no種屬: Paecilomyces│variotii提供形式: 斜面培養(yǎng)物;凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 17生長條件: 28℃
鏈霉菌產(chǎn)生代謝產(chǎn)物具有抑菌活性模式菌株: no土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 0012生長條件: 28℃
多殺性巴氏桿菌科研及血清定型模式菌株: no出血性敗血癥牛提供形式: 凍干物安全等級: 2培養(yǎng)基: 56生長條件: 37
-885℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
尖鐮孢古巴專化型(香蕉枯萎病菌)生長條件: 28℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no
芽孢桿菌屬培養(yǎng)基: CM0033模式菌株: no諾尼莖提供形式: 凍干物安全等級: 1生長條件: 30℃ -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
郎伍德鏈霉菌培養(yǎng)基: 12可用于抗菌活性及抗腫瘤活性研究土壤/近海紅樹林土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no生長條件: 28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
多主葡萄座腔菌培養(yǎng)基: 14用于該菌種群遺傳學(xué)研究及與蘋果輪紋、干腐、楊梅和石榴流膠、獼猴桃腐爛等病菌系統(tǒng)學(xué)研究。楊樹干基部提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no生長條件: 25 定期移植法
皮殼正青霉生長條件: 25℃培養(yǎng)基: 0013提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
ATCC15697=CCRC15416=CGMCC1.1853=DSM20088=模式菌株: yes安全等級: 1種屬: Bifidobacterium longum subsp. infantisintestine of infant提供形式: 凍干物模式菌株(Bifidobacterium infantis)培養(yǎng)基: 改良MRS培養(yǎng)基:MRS培養(yǎng)基+0.05%L-半胱氨(MRS培養(yǎng)基:酪胨 10.0g,牛肉粉 8.0g,酵母粉 4.0 g,葡萄糖 20.0 g,硫鎂 0.2 g,乙鈉 5.0 g,檸檬三銨 2.0 g,磷氫二鉀 2.0 g,硫錳 0.05 g,吐溫80 1.0 g,蒸餾水 1000mL。pH6.2±0.2。121℃,15min。)
-886℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
3-基-4-甲氧基 聚醚 糠基甲基硫醚
N-(2-甲基-5-硝基基)-4-(3-基)-2-嘧啶胺 1,2-丙二醇緩沖液(0.05M,PH9.8) 2-巰基-3-丁醇
3-溴-2--5-基 3-(N-對磺?;?L-丙酰氧基)-5-基吡咯 3-巰基-2-丁
4-甲氧基-3-硝基 杯[4]芳烴 5-甲基糠
CORN STEEP LIQUOR 玉米漿 66071-94-1
Sarsasapogenin 知母皂苷元 82597-74-8
Isosilybin 異水飛薊賓 72581-71-6
ISOCOLUMBIN 異古倫賓 471-54-5
大鼠脂蛋白關(guān)聯(lián)磷脂酶A2(LpPLA2)ELISA試劑盒 ,英文名: LpPLA2 ELISA Kit
Goat ierleukin 2 (IL-2) ELISA Kit 山羊白介素2(IL-2)ELISA試劑盒
MouseInsulin-likegrowthfactorbindingprotein3,IGFBP-3ELISAKIT 小鼠胰島素樣生長因子結(jié)合蛋白3(IGFBP-3)ELISA試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforHumangranulysin,GNLYELISAKit人顆粒溶素規(guī)格:48T/96T
烏頭酶(aconitase)活性熒光定量檢測試劑盒20次
ELISAKitbFGF大鼠堿性成纖維生長因子規(guī)格:48T/96T
人溶菌酶(hLYZ)轉(zhuǎn)基因成分核酸檢測試劑盒煙酰胺98-92-0中文別名:維生素B3;維生素PP;煙酰胺;尼古丁酰胺
英文名:Nicotinamide
登錄號:98-92-0
分子式:C6H6N2O
分子量:122.13
分子結(jié)構(gòu):
外觀:白色至類白色粉末
規(guī)格:20mg/支
純度:≥ 98%
用途:用于含量測定/鑒定/藥理實驗等。
提取來源:禾本科植物燕麥
溶解性:在水或乙醇中易溶,在甘油中溶解
熔點:128~132℃
藥理藥效:可用于補充營養(yǎng)及治療舌炎、皮炎等。在生物氧化呼吸鏈中起著遞氫的作用, 可促進生物氧化過程和組織新陳代謝,對維持正常組織(特別是皮膚、消化道和神經(jīng)系統(tǒng)) 的完整性具有重要作用。此外, 尚有防治心臟傳導(dǎo)阻滯、提高竇房結(jié)功能及抗快速型實驗性心律失常作用, 能顯著地改善由維拉帕米所引起的心率減慢和房室傳導(dǎo)阻滯。
貯存條件: 4℃冷藏、密封、避光
有效期: 2年
PCR的反應(yīng)條件:
因擴增片段的大小、反應(yīng)體積、使用擴增儀器的不同而不同。
◇ 循環(huán)次數(shù)
根據(jù)模板DNA的量以及擴增片段的大小,設(shè)定25~30個循環(huán)。
如果循環(huán)次數(shù)太少,擴增量不足;如果循環(huán)次數(shù)太多,則會出現(xiàn)Smear。
◇ Anneal以及Extension
合適的Anneal溫度通常在45~68℃之間 (預(yù)備實驗可2℃間隔進行)。另外,由于在60~68℃間,也有很高的活性, 因此可在此溫度范圍內(nèi)設(shè)定Anneal-Extension溫度, 進行2 Step PCR。Anneal-Extension溫度為68℃ 時,每kbp大體可設(shè)定30秒~1分鐘;當(dāng)溫度設(shè)定在68℃以下時, 時間設(shè)定可稍長一些。通常,Anneal溫度太高,有時會得不到擴增產(chǎn)物;Anneal溫度太低時,容易發(fā)生非特異性反應(yīng)。另外,Extension時間太短時,會得不到擴增產(chǎn)物或者會有一些短的非特異性產(chǎn)物優(yōu)成;而Extension時間太長時,會出現(xiàn)Smear。
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