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貨號(hào)	FS-X9843

產(chǎn)品介紹:

通過(guò)結(jié)晶紫初染和碘液媒染后，在細(xì)胞壁內(nèi)形成了不溶于水的結(jié)晶紫與碘的復(fù)合物，革蘭氏陽(yáng)性菌由于其細(xì)胞壁較厚、肽聚糖網(wǎng)層次較多且交聯(lián)致密，故遇乙醇或脫色處理時(shí)，因失水反而使網(wǎng)孔縮小，再加上它不含類(lèi)脂，故乙醇處理不會(huì)出現(xiàn)縫隙，因此能把結(jié)晶紫與碘復(fù)合物牢牢留在壁內(nèi)，使其仍呈紫色；而革蘭氏陰性菌因其細(xì)胞壁薄、外膜層類(lèi)脂含量高、肽聚糖層薄且交聯(lián)度差，在遇脫色劑后，以類(lèi)脂為主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖網(wǎng)不能阻擋結(jié)晶紫與碘復(fù)合物的溶出，因此通過(guò)乙醇脫色后仍呈無(wú)色，再經(jīng)沙黃等紅色染料復(fù)染，就使革蘭氏陰性菌呈紅色。

儲(chǔ)存條件：室溫密封保存。

有效期：一年。

中文名稱(chēng)：革蘭氏染色試劑盒

英文名稱(chēng)：

產(chǎn)品規(guī)格：200ml

貨號(hào)：FS-X9843

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

索地平英文名： Imiquimod間粘附分子-1抗體包裝5g

哚普利英文名： Imiquimod間粘附分子-1抗體包裝25g

英文名： Irinotecan間粘附分子-1抗體包裝5g

匹莫丹英文名： Irinotecan親環(huán)蛋白（親環(huán)）PPIF抗體包裝1g

普伐他丁鈉英文名： Irinotecan HCl Trihydrate過(guò)氧化氫抗體包裝1g

普拉格雷英文名： Irinotecan HCl Trihydrate內(nèi)離子通道蛋白4抗體包裝5g

羅布考英文名： Isoconazole Nitrate生長(zhǎng)調(diào)控蛋白19/環(huán)指蛋白197抗體包裝25g

氫噻英文名： Isoconazole Nitrate卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域蛋白139抗體包裝5g

匹地爾英文名： Isotretinoin染色體修飾蛋白1抗體（金屬蛋白1）包裝1g

群多普利英文名： Isotretinoin鈣依賴(lài)分泌激活蛋白1抗體包裝250mg

舒伐他汀鈣/羅蘇伐他汀鈣英文名： Meropenem trihydrate小腦肽1抗體包裝1g

嘧達(dá)莫英文名： Meropenem trihydrate小腦肽2抗體包裝250mg

替卡格雷英文名： Kanamycin mono sulfate小腦肽4抗體包裝100g

米沙坦英文名： Kanamycin mono sulfate腦海綿狀血管畸形蛋白2抗體包裝25g

舍林鹽英文名： Ketanserin Tartrate表皮生長(zhǎng)因子樣蛋白2抗體包裝1g

焦曲霉Aspergillus│ustus 質(zhì)量規(guī)格：HPLC>99%,標(biāo)準(zhǔn)品氧化低密度脂蛋白試劑盒柚皮;Naringenin

石油棲熱腔菌Thermosipho│geolei 質(zhì)量規(guī)格：>99%延伸蛋白A試劑盒楊梅;Myricetin

索馬里鏈霉菌Streptomyces│somaliensis 質(zhì)量規(guī)格：>99%煙酰腺二核磷試劑盒異皮啶;Isofraxidin
革蘭氏染色試劑盒太平洋大洋桿狀分散橙37亮氨肽3

堅(jiān)脆嗜熱子囊 2-氨基-6-苯并噻唑可溶性CD44分子

環(huán)狀芽胞桿鄰苯二甲單丁酯趨化因子配體2

德氏乳桿保加利亞亞種馬波沙星嗜性粒主要堿性蛋白

鮮綠青霉芥細(xì)小病B19-IgG抗體

金龜子綠僵* 5-氨基苯并咪唑酮JOE因子

平菇十一CD47蛋白

假單胞屬丁基三化錫帶3蛋白

腐皮鐮孢 2,5-己二酮抗角蛋白抗體

黑曲霉苯己烷促泌

毛韌革乙二硫代S-甲基轉(zhuǎn)移

莫哈韋芽孢桿氟菊酯早期分泌抗原靶6

枯草芽孢桿苯靈血管性血友病因子裂解

盤(pán)孢屬 4-羥基-4'-異氧基二苯砜絨毛膜促性腺α

黃孢平革沙拉沙星乙型肝炎病19

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