Cisplatin (DNA交聯(lián)劑/細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10243

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：Cisplatin

產(chǎn)品規(guī)格：50mg

Cisplatin 是一種無機(jī)的水溶性的鉑配合物，通過形成DNA 交聯(lián)劑抑制DNA 合成。

Cisplatin 通過與DNA 相互作用形成DNA 交聯(lián)劑誘導(dǎo)細(xì)胞毒性，激活多條信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路, 包括Erk, p53, p73, 和MAPK,其中對(duì)激活凋亡影響大。Cisplatin (30 mM)處理HeLa 細(xì)胞6小時(shí)，顯著激活Erk，持續(xù)到隨后的14個(gè)小時(shí)期間。Cisplatin 還具有有效的抗腫瘤活性，誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞死亡。Cisplatin 可引起腎小管上皮細(xì)胞（RPTC）發(fā)生細(xì)胞凋亡，引起細(xì)胞收縮，使caspase 3活性提高50倍，磷脂酰絲氨suan外翻提高4倍，染色質(zhì)凝集和DNA 倍性分別提高5 和15倍。Cisplatin (800 μM)處理RPTC 4個(gè)小時(shí)，產(chǎn)生細(xì)胞壞死的典型特征。

別名：cisplatinum, CDDP, Platinol and Platinol-AQ

：15663-27-1

分子式：Cl2H6N2Pt

分子量：300.05

儲(chǔ)存：-20℃，有效期36個(gè)月

中文名稱：Cisplatin (DNA交聯(lián)劑/細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑)

英文名稱：Cisplatin

產(chǎn)品規(guī)格：50mg

貨號(hào)：FS-X10243

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

釀酒酵母乙?；M蛋白H2B抗體Human SLC38A1 大鼠KI-67 免疫試劑盒

膠凍樣芽胞桿菌乙?；M蛋白H2B抗體Human SLC25A34 大鼠Kelch樣ECH相關(guān)蛋白1(KEAP1)免疫試劑盒

枯草芽孢桿菌磷化組蛋白H2AX抗體Human SLC25A33 大鼠I型膠原(COL1)免疫試劑盒

平田頭菇6-2磷化熱休克蛋白27抗體Human SLC25A45 大鼠II型角蛋白,骨架71(KRT71)免疫試劑盒

藤黃毛殼磷化熱休克蛋白70抗體Human ATP6AP2(Renin receptor) 大鼠G蛋白偶聯(lián)膽汁受體1(GPBAR1)免疫試劑盒

焦曲霉磷化熱休克因子1抗體Human SLC27A2 大鼠GTP KRas 免疫試劑盒

釀酒酵母磷化熱休克因子1抗體Human SLC25A46 大鼠Ghrelin受體(Ghsr)免疫試劑盒

雜色云芝磷化熱休克蛋白70抗體Human SLC27A3 大鼠GATA結(jié)合蛋白4(GATA4)免疫試劑盒

桔青霉E3泛蛋白連接HACE1抗體Human RHOC(Rho-related GTP-binding protein RhoC) 大鼠F-肌動(dòng)蛋白免疫試劑盒

蠟狀芽孢桿菌結(jié)節(jié)性硬化癥蛋白1抗體Human SLC22A15 大鼠FMS樣酪激3配體(Flt3L)免疫試劑盒

松口蘑肝核因子4α抗體Human SLAIN2 大鼠FMS樣酪激3(Flt3)免疫試劑盒

釀酒酵母磷化肝核因子4α抗體Human SLAMF7 大鼠FK506結(jié)合蛋白12-雷帕霉相關(guān)蛋白1(FRAP1)免疫試劑盒

鮑魚側(cè)耳淋巴特異性解旋抗體Human SLC10A3 大鼠E鈣黏蛋白/上皮鈣黏蛋白(E-Cad)免疫試劑盒

竹針孢座囊菌HRAS樣抑制因子2抗體Human SLC12A4 大鼠ERp57 免疫試劑盒

梨多細(xì)菌源菌熱休克蛋白家族40抗體Human SLC12A2(Solute carrier family 12 member 2) 大鼠E3-RSIκB 免疫試劑盒

嗜鹽動(dòng)性球菌糖蛋白P43抗體Human SLC13A4 大鼠D-乳脫氫(D-LDH)免疫試劑盒

熱帶假絲酵母Candida│tropicalis 質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=5%白樺脂

蠟狀芽孢桿菌Bacillus│cereus Frankland and Frankland 質(zhì)量規(guī)格：100μg/ml,u=4%白樺脂

冰島硫化葉菌Sulfolobus│islandicus 質(zhì)量規(guī)格：10μg/ml,u=6%羽扇豆
Cisplatin (DNA交聯(lián)劑/細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)劑)枯草芽孢桿 2-羥基-3-溴-6-磷化α；β水解域包含蛋白5

釀酒酵母 2--3-氟-6-磷化圍脂滴蛋白

立枯絲核 2-溴-6-甲基-3-硝基吡啶堿性磷

韓國(guó)靈芝 Boc-DL-乙酰酯

玫瑰栗色鏈霉四甲基氟化谷脫羧

側(cè)耳屬 3-(甲基磺?；?苯基γ-氨基丁轉(zhuǎn)氨

桿狀毛霉 3-羥基-4,4,4-三氟丁乙酯補(bǔ)體因子D

囊軸發(fā)仙囊軸亞種喹啉-4-磷化腺活化蛋白激

微核鏈霉 3,4,5-三羧苯二單酰

須芒草伯克霍爾德氏 7-羥基庚腎

樣品粉碎機(jī) (-)-二甲基-2,3-鄰異亞基-L-酯周期依賴性激抑制因子1A

產(chǎn)紫青霉甘氨酰-L-色P4503A4

大腸埃希 2-溴-4-羥基吡啶補(bǔ)體片段

蘑菇 3-硝基鄰苯二卵清蛋白IgG1抗體

Burkholderia anthina 1-氧雜螺[2.5]辛烷-2-甲卵清蛋白IgG2a抗體

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