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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> IGF-1R/IR抑制劑(BMS-536924)
貨號(hào) | FS-X10969 |
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英文名稱:BMS-536924
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg
貨號(hào):FS-X10969
產(chǎn)品介紹:
BMS-536924是ATP競(jìng)爭(zhēng)性IGF-1R/IR抑制劑,IC50分別為100nM/73nM。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):468740-43-4 純度:98.73% 分子量:479.96 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
新城疫病人肌腱蛋白RBacillus thuringiensis subsp. kurstaki小鼠血管活性腸肽(VIP)
徐家莊鏈霉菌人生長(zhǎng)相關(guān)蛋白43Bacillus thuringiensis subsp. kurstaki小鼠甲狀腺過(guò)氧化物(TPO)
斯氏土地桿菌大鼠cAMP反應(yīng)元件結(jié)合蛋白Bacillus thuringiensis subsp. morrisoni小鼠甲狀腺過(guò)氧化物(TPO)
分散泛菌人聚集蛋白Bacillus thuringiensis subsp. ostroniae小鼠αL巖藻糖(AFU)
瓦克青霉人Agouti相關(guān)蛋白Bacillus thuringiensis subsp. shandongiensis小鼠αL巖藻糖(AFU)
污黑腐皮殼人膜輔蛋白Bacillus thuringiensis subsp. pacificus小鼠血管舒緩激肽(BK)
Brenneria rubrifaciens人延伸蛋白ABacillus thuringiensis subsp. sotto小鼠血管舒緩激肽(BK)
釀酒酵母人?;さ鞍?/span>Bacillus thuringiensis subsp. thuringiensis小鼠胰島原(PI)
毛頭鬼傘人殺菌性/通透性增加蛋白Bacillus thuringiensis subsp. thuringiensis小鼠胰島原(PI)
棘孢新內(nèi)果菌人外基質(zhì)磷糖蛋白Bacillus thuringiensis subsp. thuringiensis小鼠抗IgE受體抗體
法氏檸檬桿菌人復(fù)制蛋白ABacillus thuringiensis subsp. thuringiensis小鼠抗IgE受體抗體
產(chǎn)芽胞梭菌(生胞梭菌)(可訂購(gòu))人軟骨寡聚基質(zhì)蛋白Bacillus thuringiensis subsp. thuringiensis小鼠抗IVIgG抗體
短芽孢桿菌人抗原提呈相關(guān)轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白/T活化蛋白Bacillus thuringiensis subsp. thuringiensis小鼠抗IVIgG抗體
灰平鏈霉菌人免疫抑制性蛋白Bacillus thuringiensis subsp. thuringiensis小鼠抗心肌抗體(AMA)
褐單梗曲霉人麥角蛋白IgABacillus thuringiensis subsp. thuringiensis小鼠抗心肌抗體(AMA)
泡盛曲霉人發(fā)動(dòng)蛋白2Bacillus thuringiensis subsp. tianmensis小鼠銅藍(lán)蛋白(CP/CER)
抑癌基因NDRG3抗體小白臍傘犬腎細(xì)胞系/野生型
有絲分裂氧化1抗體果瘡痂芽枝霉荷蘭黑白花奶牛牛肺細(xì)胞
細(xì)胞粘附分子CD112抗體擬隱孢殼獼猴肌肉細(xì)胞
神經(jīng)母細(xì)胞瘤抑瘤蛋白1抗體氈狀金孢霉小耳豬肺細(xì)胞
IGF-1R/IR抑制劑(BMS-536924)粉虱座殼孢 Sinoacutine?;趸?/span>
灰葡萄孢 Luteosporin3-羥酰脫氫
大腸埃希氏 Syrosingopine脯脫氫
根癌土壤桿 Pterosin D補(bǔ)體B因子
Marisediminicola Pterosin Z甘露糖結(jié)合蛋白;甘露糖結(jié)合凝集
黑木耳 Glucosyringic acid蛋白磷1
詹氏桿 Cajanin可溶性谷草轉(zhuǎn)氨
枯草芽孢桿 Kaempferol 3-neohesperidoside煙酰腺二核
北方棲低境 Sideroxylin還原型輔Ⅰ
假諾卡氏 Psoracorylifol C前列腺E3
豬丹絲 Inulanolide A球蛋白
美味側(cè)耳 1,2,3,4-Tetrahydronorharman-1-one繆勒管抑制物質(zhì);抗繆勒管
芽孢桿屬 Thunalbene角鯊烯環(huán)氧化
脫硫戈登氏 Cathayanon I14-α去甲基化
釀酒酵母 Toddacoumaquinoneβ-1,3葡聚糖合成
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