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貨號	FS-X10749

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；

4．將經過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。

中文名稱：mTORC1和mTORC2抑制劑(OSI-027)

英文名稱：OSI-027

產品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

貨號：FS-X10749

產品介紹:

OSI-027是mTORC1和mTORC2選擇性抑制劑，IC50為22nM和65nM，比對PI3Kα，PI3Kβ，PI3Kγ和DNA-PK的抑制性高100倍。

注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號：936890-98-1

純度：98.15%

分子量：406.44

儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。

實驗報告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；

2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；

5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

腐霉鋅指蛋白300(抗原)Anti-GMFB Antibody人相關蛋白A(CagA)

枯草芽胞桿菌鋅指脂蛋白-1a(抗原)Anti-GM-CSF(CSF2) Antibody人相關蛋白A(CagA)

曲霉屬鋅指脂蛋白-1b(抗原）Anti-GMFG Antibody人胃抑(GIP)

小單孢菌人鋅指脂蛋白-1c(抗原)Anti-GNA14 Antibody人胃抑(GIP)

真鲴希瓦氏菌干擾-γ多肽抗原（大、小鼠）Anti-GNAI3 Antibody人胃泌釋放多肽(GRP)

淡紫擬青霉干擾-β抗原Anti-GNA14 Antibody人胃泌釋放多肽(GRP)

竹瘤座菌干擾-β抗原Anti-GNAL Antibody人胃泌釋放肽前體(ProGRP)

冷杉粘褶菌前列腺干抗原Anti-GNAT1 Antibody人胃泌釋放肽前體(ProGRP)

壞損尾孢聚集蛋白抗原Anti-GNAT1 Antibody人膠原蛋白Ⅱ(HCBⅡ)

泡盛曲霉三磷腺檸檬裂解Anti-GNAZ Antibody人膠原蛋白Ⅱ(HCBⅡ)

紫芝脂肪增強結合蛋白1Anti-GNAT2 Antibody人促胰液/胰泌(Secretin)

枯草芽孢桿菌磷化腺單磷活化蛋白激α1Anti-GNB5 Antibody人促胰液/胰泌(Secretin)

鼠李糖乳桿菌腎上腺髓質(1-52)Anti-GNE Antibody人多肽YY(Peptide-YY)

美澳型核果褐腐病菌淀粉樣肽前體蛋白（多肽抗原）Anti-GNB5 Antibody人多肽YY(Peptide-YY)

土壤柔武氏菌促腎上腺皮質激(1-39)Anti-GNE Antibody人促胃液受體(GsaR)

干酪乳桿菌脂聯(lián)（多肽抗原）Anti-GNL1 Antibody人促胃液受體(GsaR)

絲/蘇蛋白激SIK1抗體藤黃八疊球菌人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細胞

基底膜相關軟骨蛋白多糖抗體潮濕纖維單胞菌人多發(fā)性骨髓瘤細胞（白介15基因修飾）

小細胞跨膜糖化蛋白抗體產黃纖維單胞菌高轉移潛能肝癌細胞

合胞1抗體黃色短桿菌人皮膚T淋巴瘤細胞
mTORC1和mTORC2抑制劑(OSI-027)廣食黃桿 L-色氨環(huán)磷鳥

喀斯特盤孢間甲苯基溴化鎂溶液補體蛋白3

黑曲霉四氮唑補體蛋白4

擴展青霉 1,2,4-三氮唑白介9

靈芝屬正十八硫口蹄疫病非結構蛋白3ABC抗體

科羅拉多擬無枝噻唑前列腺F2α

紅樹林小單孢 2-甲基-3-(甲硫基)吡尿二磷葡萄糖轉移

球孢白僵鄰烯基氧基苯甲布氏桿

柳樹爛皮病雙酮烯酰轉化生長因子β1

橙黃鵝膏（不可訂購）三-O-乙?；?D-葡萄烯糖過氧化5

枯草芽孢桿 DL-氨酰-DL-抑制B

賴芽胞桿屬 4,5-二甲基-3-羥基-2,5-二-2-酮副流感病IgG抗體

褐囊蜜環(huán) 3,4-二甲氧基溴苯脂肪甘油三酯脂

枯草芽孢桿化高鐵血紅蛋白標準液線粒體甘油3磷?；D移

假單孢 2-甲基-3-呋喃硫甘油二酯O-?；D移2
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細胞100μL/孔，通常細胞增殖實驗每孔加入100微升2000個細胞，細胞毒性實驗每孔加入100微升5000～10000個細胞（具體每孔所用的細胞的數(shù)目，需根據(jù)細胞的大小，細胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.

2、.加入適當濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細胞培養(yǎng)箱中孵育適當時間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度（如無570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結果分析

a、細胞的存活率：將各測試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無細胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無細胞），各重復孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細胞的OD 值，C 為對照細胞的OD 值。細胞存活率% =（加藥細胞OD/對照細胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)