mTORC1和mTORC2抑制劑(OSI-027)-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	FS-X10749

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：mTORC1和mTORC2抑制劑(OSI-027)

英文名稱：OSI-027

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg

貨號(hào)：FS-X10749

產(chǎn)品介紹:

OSI-027是mTORC1和mTORC2選擇性抑制劑，IC50為22nM和65nM，比對(duì)PI3Kα，PI3Kβ，PI3Kγ和DNA-PK的抑制性高100倍。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：936890-98-1

純度：98.15%

分子量：406.44

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

腐霉鋅指蛋白300(抗原)Anti-GMFB Antibody人相關(guān)蛋白A(CagA)

枯草芽胞桿菌鋅指脂蛋白-1a(抗原)Anti-GM-CSF(CSF2) Antibody人相關(guān)蛋白A(CagA)

曲霉屬鋅指脂蛋白-1b(抗原）Anti-GMFG Antibody人胃抑(GIP)

小單孢菌人鋅指脂蛋白-1c(抗原)Anti-GNA14 Antibody人胃抑(GIP)

真鲴希瓦氏菌干擾-γ多肽抗原（大、小鼠）Anti-GNAI3 Antibody人胃泌釋放多肽(GRP)

淡紫擬青霉干擾-β抗原Anti-GNA14 Antibody人胃泌釋放多肽(GRP)

竹瘤座菌干擾-β抗原Anti-GNAL Antibody人胃泌釋放肽前體(ProGRP)

冷杉粘褶菌前列腺干抗原Anti-GNAT1 Antibody人胃泌釋放肽前體(ProGRP)

壞損尾孢聚集蛋白抗原Anti-GNAT1 Antibody人膠原蛋白Ⅱ(HCBⅡ)

泡盛曲霉三磷腺檸檬裂解Anti-GNAZ Antibody人膠原蛋白Ⅱ(HCBⅡ)

紫芝脂肪增強(qiáng)結(jié)合蛋白1Anti-GNAT2 Antibody人促胰液/胰泌(Secretin)

枯草芽孢桿菌磷化腺單磷活化蛋白激α1Anti-GNB5 Antibody人促胰液/胰泌(Secretin)

鼠李糖乳桿菌腎上腺髓質(zhì)(1-52)Anti-GNE Antibody人多肽YY(Peptide-YY)

美澳型核果褐腐病菌淀粉樣肽前體蛋白（多肽抗原）Anti-GNB5 Antibody人多肽YY(Peptide-YY)

土壤柔武氏菌促腎上腺皮質(zhì)激(1-39)Anti-GNE Antibody人促胃液受體(GsaR)

干酪乳桿菌脂聯(lián)（多肽抗原）Anti-GNL1 Antibody人促胃液受體(GsaR)

絲/蘇蛋白激SIK1抗體藤黃八疊球菌人惡性非霍奇金淋巴瘤患者的自然殺傷細(xì)胞

基底膜相關(guān)軟骨蛋白多糖抗體潮濕纖維單胞菌人多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞（白介15基因修飾）

小細(xì)胞跨膜糖化蛋白抗體產(chǎn)黃纖維單胞菌高轉(zhuǎn)移潛能肝癌細(xì)胞

合胞1抗體黃色短桿菌人皮膚T淋巴瘤細(xì)胞
mTORC1和mTORC2抑制劑(OSI-027)廣食黃桿 L-色氨環(huán)磷鳥

喀斯特盤孢間甲苯基溴化鎂溶液補(bǔ)體蛋白3

黑曲霉四氮唑補(bǔ)體蛋白4

擴(kuò)展青霉 1,2,4-三氮唑白介9

靈芝屬正十八硫口蹄疫病非結(jié)構(gòu)蛋白3ABC抗體

科羅拉多擬無(wú)枝噻唑前列腺F2α

紅樹林小單孢 2-甲基-3-(甲硫基)吡尿二磷葡萄糖轉(zhuǎn)移

球孢白僵鄰烯基氧基苯甲布氏桿

柳樹爛皮病雙酮烯酰轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β1

橙黃鵝膏（不可訂購(gòu)）三-O-乙?；?D-葡萄烯糖過(guò)氧化5

枯草芽孢桿 DL-氨酰-DL-抑制B

賴芽胞桿屬 4,5-二甲基-3-羥基-2,5-二-2-酮副流感病IgG抗體

褐囊蜜環(huán) 3,4-二甲氧基溴苯脂肪甘油三酯脂

枯草芽孢桿化高鐵血紅蛋白標(biāo)準(zhǔn)液線粒體甘油3磷酰基轉(zhuǎn)移

假單孢 2-甲基-3-呋喃硫甘油二酯O-?；D(zhuǎn)移2
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)