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貨號 | FS-X10456 |
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產(chǎn)品介紹:
英文名稱:BX795 產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg|200mg BX795是一種有效的,選擇性的TBK1/PDK1雙重抑制劑,IC50值為2nM/6nM,對其選擇性是對PKA,PKC,c-Kit,GSK3β等的50多倍。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗,嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號:702675-74-9 純度:99.33% 分子量:591.47 儲存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
中文名稱:TBK1和PDK1抑制劑(BX795)
英文名稱:BX795
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg|200mg
貨號:FS-X10456
實(shí)驗報告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大??; 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗每孔加入100微升2000個細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗每孔加入100微升5000~10000個細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時.
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時,使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長處檢測每孔的光密度(如無570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時;
4.將經(jīng)過計數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時,將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測。
魔鬼弧菌磷化周期檢查控制蛋白質(zhì)抗體Anti-CREB1 Antibody轉(zhuǎn)移抑制因子1(MTSS1)
黃桿菌屬磷化原癌基因c-Raf抗體Anti-CRB1 Antibody轉(zhuǎn)位因子蛋白2(TSPO2)
大孢鏈霉菌磷化原癌基因c-Raf抗體Anti-CREB1 Antibody轉(zhuǎn)位因子蛋白(TSPO)
毛柄金錢菌(金針菇)磷化原癌基因c-Raf抗體Anti-CREB3L1 Antibody轉(zhuǎn)位蛋白(TSN)
酒酒球菌磷化原癌基因c-Raf抗體Anti-CRH Antibody轉(zhuǎn)(TKT)
毛霉屬磷化原癌基因c-Raf抗體Anti-CRK Antibody轉(zhuǎn)鐵蛋白受體2(TFR2)
釀酒酵母磷化原癌基因c-Raf抗體Anti-CRK Antibody(PB0128)轉(zhuǎn)鐵蛋白受體(TFR)
中慢生華癸根瘤菌磷化原癌基因c-Raf抗體Anti-CRLF2 Antibody轉(zhuǎn)鐵蛋白(TRF)
四脊曲霉磷化視網(wǎng)膜母瘤相關(guān)蛋白1抗體Anti-CRKL Antibody轉(zhuǎn)縮(TALDO1)
枯草芽孢桿菌磷化視網(wǎng)膜母瘤相關(guān)蛋白1抗體Anti-CRP Antibody轉(zhuǎn)錄因子20(TCF20)
肉色栓菌磷化核糖體S6蛋白激抗體Anti-CRP Antibody轉(zhuǎn)錄銜接因子3(TADA3)
西洼湖戈登氏菌磷化核糖體S6蛋白激抗體Anti-CRP Antibody轉(zhuǎn)錄銜接因子1(TADA1)
芽孢桿菌磷化視網(wǎng)膜母瘤相關(guān)蛋白1抗體Anti-CRP Antibody轉(zhuǎn)錄激活因子7(ATF7)
Escherichia磷化視網(wǎng)膜母瘤相關(guān)蛋白1抗體Anti-CRTC1 Antibody轉(zhuǎn)錄激活因子6(ATF6)
青霉屬磷化核糖體S6蛋白激抗體Anti-CRTC2 Antibody轉(zhuǎn)錄激活因子5(ATF5)
穿孔假單胞菌磷化核糖體S6蛋白激抗體Anti-CRTC1 Antibody轉(zhuǎn)錄激活因子4(ATF4)
條紋擬盤多毛孢Pestalotiopsis│virgatula 質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
: F612資源名稱: 擬青霉 質(zhì)量規(guī)格:0.98
乳房鏈球菌Streptococcus│uberis 質(zhì)量規(guī)格:0.99
TBK1和PDK1抑制劑(BX795)霍氏腸桿 4-(乙氨甲基)吡啶三磷磷脂酰肌
芽胞桿 2-乙氧基環(huán)己酮α1
短小芽孢桿 2--4-羥基苯甲Coll2-1
三寶壟根霉 4-氨基-3-苯PP2A癌癥抑制抑制因子
釀酒酵母 1-溴-4-(三氟甲基硫代)苯非酯化脂肪
季也蒙邁耶氏酵母 9,9-二甲基芴-2-(含數(shù)量不等的酐)異腎上腺
薄花邊傘1-5 對磷二鈉六水合物(PNPP)神經(jīng)纖維網(wǎng)蛋白2
蛹蟲草 2-氨基-5-吡磷化核轉(zhuǎn)錄因子p65
燕麥?zhǔn)任鞴蟻喎N* 2-氨基-6-吡凝血原前體片段F2
皮生毛霉 5-吡-2-羧甲酯血鈣
大腸桿 三氟磺甲酯神經(jīng)肽1
產(chǎn)黃青霉 三氟磺甲酯維生D結(jié)合蛋白
佛雷德里克斯堡假單胞 雙(三環(huán)己基磷)鈀(0)乙酰化
鞘氨盒屬 BOC-L-4-水通道蛋白2抗體
黑木耳 1-甲基-L-組水通道蛋白3抗體
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