當前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>核酸檢測試劑盒>>熒光PCR法>> 50T口蹄疫病毒通用型(FMDV-U)核酸檢測試劑盒
服務流程:
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務。
產(chǎn)品名稱 | 分類 | 貨號 |
口蹄疫病毒通用型(FMDV-U)核酸檢測試劑盒 | 熒光-PCR法 | FS-P10303 |
特異性強
PCR反應的特異性決定因素為:
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合;
②堿基配對原則;
③Taq DNA聚合酶合成反應的忠實性;
④靶基因的特異性與保守性。
PCR技術(shù)的定量原理:
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擴增曲線
在Real-time qPCR中,對整個PCR反應擴增過程進行了實時的檢測并記錄其熒光信號,隨著反應的進行,監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線,即為擴增曲線。熒光擴增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴增早期,擴增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋,無法判斷產(chǎn)物量的變化,此時即為基線期。
PCR反應過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的,隨著反應循環(huán)數(shù)的增加,最終PCR反應不再以指數(shù)形式生成模板,從而進入“平臺期”。在該時期,擴增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加,PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關系,所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。
實驗注意事項:
1)RT-PCR可以檢測組織、細胞、血液、細菌等很多材料,不同的樣本有不同要求,實驗前請充分溝通確認實驗方案和樣本情況;
2)客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準確的名稱和ID號;
3)客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4)樣本保存于液氮或干冰,也可以保存于液中。
實時熒光定量PCR是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程,通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學原理包括探針類和非探針類兩類,探針類是利用與靶細胞序列特異性雜交的探針來指示擴增產(chǎn)物的增加,非探針類是利用熒光染料或者特異性設計的引物來指示擴增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進行定量(包括定量和相對定量)和定性分析。主要服務:DNA或RNA的定量分析、基因表達差異分析、基因分型。
熒光假單胞菌培養(yǎng)基: 33單獨使用可清防蠟,含油污水處理提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 37℃ -80℃冰箱凍結(jié)法
裂孔平伏菌培養(yǎng)基: 14模式菌株: no榆葉梅枯死木樹皮表面提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1生長條件: 25 定期移植法
釀酒酵母培養(yǎng)基: CM0077甘油。提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28-30℃ -80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
大腸埃希氏菌基因工程常用菌模式菌株: no污泥提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 33生長條件: 37℃
假交替單胞菌培養(yǎng)基: 821產(chǎn)酶微生物/產(chǎn)蛋白酶、脂肪酶(三丁甘油酯法)、淀粉酶菌株 產(chǎn)酶微生物/淀粉酶、脂酶(三丁甘油酯)、蛋白酶、脂酶(Tween80)陽性沉積物/棕褐色沉積物提供形式: 凍干物模式菌株: no生長條件: 15℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
-272℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
污黑腐皮殼生長條件: 25-28培養(yǎng)基: 14提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no 定期移植法
友好戈登氏菌微生物采油的研究模式菌株: no油田含蠟樣品提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 33生長條件: 37℃
蘇云金芽孢桿菌生長條件: 30℃培養(yǎng)基: 2提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法
豌豆根瘤菌生長條件: 28℃培養(yǎng)基: 545提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法
普通赤細菌培養(yǎng)基: 471潛在的有機污染物降解菌/分離自環(huán)己酮降解菌群沉積物/深海沉積物提供形式: 凍干物模式菌株: no生長條件: 25℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
ATCC35666培養(yǎng)基: CM0109模式菌株: no種屬: Streptococcus│dysgalactiae提供形式: 凍干物安全等級: 2生長條件: 37℃ 真空冷凍干燥法
-273℃冰箱凍結(jié);真空冷凍干燥
鏈霉菌屬菌種抗糞腸球菌模式菌株: no土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0027生長條件: 28C
雞痘病研究模式菌株: no病雞結(jié)痂提供形式: 凍干物安全等級: 2培養(yǎng)基: 0生長條件: 37
擬皺褶假絲酵母培養(yǎng)基: 0013模式菌株: noICU患者痰標本提供形式: 凍干物安全等級: 2生長條件: 20℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
UBA培養(yǎng)基250g啤酒中厭氧菌檢測
MC培養(yǎng)基 MC Medium 食品中乳菌檢測的
安德雷德氏糖類肉湯 Andrade,s Carbohydrate Broth 250克 細菌的糖發(fā)酵試驗
腦膜炎奈瑟氏菌糖發(fā)酵瓊脂基礎250g/瓶腦膜炎奈瑟氏菌糖發(fā)酵試驗incubationmedia腦膜炎奈瑟氏菌糖發(fā)酵瓊脂基礎250g/瓶腦膜炎奈瑟氏菌糖發(fā)酵試驗
EnterococcusfaecalisAgar
3.5% NaC1賴脫羧酶發(fā)酵管 3.5% NaC1賴脫羧酶發(fā)酵管 20支 BR
色肉湯發(fā)酵管 色肉湯發(fā)酵管 20支 BR
MR-VP發(fā)酵管 MR-VP發(fā)酵管 20支 BR
尿素酶發(fā)酵管 尿素酶發(fā)酵管 20支 BR
口蹄疫病毒通用型(FMDV-U)核酸檢測試劑盒木糖賴氨脫氧膽鹽瓊脂規(guī)格:250g用途:用于藥品或生物制品中沙門氏菌選擇分離培養(yǎng)
10%NaCl胰胨水規(guī)格:20支詳情介紹
多粘菌素E規(guī)格:1g用途:用于抑制革蘭氏陰性菌生長
雙歧桿菌BS培養(yǎng)基(不含瓊脂)規(guī)格:250g用途:用于雙歧桿菌增菌培養(yǎng)
平板計數(shù)瓊脂平板(9cm)Plate Count Agar規(guī)格:10個/包用途:國際標準平板計數(shù)瓊脂,含糖,用于細菌總數(shù)的測定
四環(huán)素檢定瓊脂規(guī)格:250g用途:用于四環(huán)素殘留的微生物學檢定(SN標準)
PCR檢測試劑盒:
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中,按100g:3ml的比例加入Trizol試劑,嚴格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進行。
(1)加Trizol(按3ml/100mg組織,寧多勿少)置于玻璃勻漿器中勻漿后,冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中,4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中,室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol,振蕩15s,室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細吸取上層水相,移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol,振搖,置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min,EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清,紙巾吸干,加入75%乙醇1ml,振搖,充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇,空氣干燥10min(可離心加快干燥,盡量吸盡離心液體)。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中(可吹打混勻),-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度,所有標本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳,顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
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