實時熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實時熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類和非探針類兩類，探針類是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類是利用熒光染料或者特異性設(shè)計的引物來指示擴(kuò)增的增加。運用該技術(shù)可以對DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對定量）和定性分析。主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

PCR技術(shù)的定量原理：
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擴(kuò)增曲線
在Real-time qPCR中，對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實時的檢測并記錄其熒光信號，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測到的熒光信號可以繪制成一條曲線，即為擴(kuò)增曲線。熒光擴(kuò)增曲線一般分為基線期、指數(shù)增長期和平臺期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號被熒光背景信號所掩蓋，無法判斷產(chǎn)物量的變化，此時即為基線期。
PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺期”。在該時期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無線性關(guān)系，所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計算出初始模板量。
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測——樣品cDNA合成——定量試驗——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
實驗注意事項：
1）RT-PCR可以檢測組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實驗前請充分溝通確認(rèn)實驗方案和樣本情況；
2）客戶盡可能提供實驗的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱和ID號；
3）客戶盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于液中。
PCR檢測試劑盒：
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說明書的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min，EP管底部可見白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
特異性強
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實性；
④靶基因的特異性與保守性。
大腸埃希氏菌動物疫苗研究模式菌株: no種鴨大腸提供形式: 斜面培養(yǎng)物；凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 2生長條件: 37℃

云南紅球菌培養(yǎng)基: 471微生物/耐冷菌沉積物/表層沉積物提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no生長條件: 15℃ 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

小單孢菌培養(yǎng)基: 0027代謝產(chǎn)物具有抗真菌活性。提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法；礦物油法；定期移植法

 F598模式菌株: no安全等級: 1種屬: Aspergillus│sp.土壤提供形式: 凍干物培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25℃

 -265℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

黑木耳生長條件: 25℃培養(yǎng)基: 0014提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法；礦物油法；定期移植法

大腸埃希菌用于科研模式菌株: no死亡鵝提供形式: 凍干物安全等級: 2培養(yǎng)基: 335生長條件: 37

小單孢菌屬抗細(xì)菌；抗金黃色葡萄球菌；抗枯草芽孢桿菌模式菌株: no樹根土提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: CM0012生長條件: 35-37C

鼻疽伯克霍爾德氏菌用于科研模式菌株: no病畜提供形式: 凍干物安全等級: 2培養(yǎng)基: 59生長條件: 37

黑曲霉培養(yǎng)基: CM0077糖化菌。提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no生長條件: 28-30℃ 真空冷凍干燥法

腐皮鐮孢菌培養(yǎng)基: 14模式菌株: no花椒根系提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1生長條件: 25-28 定期移植法

 -266℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

姬菇食用模式菌株: no朽木提供形式: 凍干物安全等級: 1培養(yǎng)基: 14生長條件: 25℃

曲霉屬生長條件: 25℃培養(yǎng)基: CM0014提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法

 400產(chǎn)生代謝產(chǎn)物具有抑菌活性模式菌株: no種屬: Streptomyces│sp.提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1培養(yǎng)基: 0012生長條件: 28℃

亮白曲霉生長條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0015提供形式: 凍干物安全等級: 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

尿素酶瓊脂基礎(chǔ)250g生化培養(yǎng)基，細(xì)菌脲酶檢測(GB、SN標(biāo)準(zhǔn))

Mediaforisolationofmagnetotacticbacteria

乳糖蛋白胨培養(yǎng)液 Lactose Peptone Broth 250 飲用水，水源水中總大腸菌群的測定(GB標(biāo)準(zhǔn))

HB培養(yǎng)基250g/瓶植物組織培養(yǎng)incubationmediaHB培養(yǎng)基250g/瓶植物組織培養(yǎng)

FB1(Half-Fraser)添加劑(A、B) 2ml/支*40 每支添加到225ml HBJ006中

3.5% NaC1甘露醇發(fā)酵管  3.5% NaC1甘露醇發(fā)酵管  20支  BR

1% NaC1纖維二糖發(fā)酵管  1% NaC1纖維二糖發(fā)酵管  20支  BR

1% NaC1甘露糖發(fā)酵管  1% NaC1甘露糖發(fā)酵管  20支  BR

3.5% NaC1葡萄糖磷鹽胨水發(fā)酵管  3.5% NaC1葡萄糖磷鹽胨水發(fā)酵管  20支  BR
偽狂犬病毒野毒株(PRV-gE)核酸檢測試劑盒酵母粉瓊脂規(guī)格：250g用途：用于水中細(xì)菌總數(shù)的檢測(ISO標(biāo)準(zhǔn))

PALCAM瓊脂添加劑(A+B)規(guī)格：10支用途：添加于HB4188培養(yǎng)基中

波爾頓選擇性增菌肉湯添加劑規(guī)格：2ml/支*5用途：每支添加于225ml中HB0273中

血液瓊脂基礎(chǔ)規(guī)格：250g用途：供分離營養(yǎng)要求較高的致病菌用，后加血液制成血平板

pH9.6葡萄糖肉湯規(guī)格：250g用途：用于產(chǎn)乳的鏈球菌鑒定

Todd-Hewitt肉湯（THB）規(guī)格：250g用途：用于B群鏈球菌β-溶血素制備中金黃色葡萄球菌的培養(yǎng)（SN標(biāo)準(zhǔn)）