實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi)，探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

PCR技術(shù)的定量原理：
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擴(kuò)增曲線(xiàn)
在Real-time qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線(xiàn)，即為擴(kuò)增曲線(xiàn)。熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)一般分為基線(xiàn)期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線(xiàn)期。
PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線(xiàn)性關(guān)系，所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶(hù)盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào)；
3）客戶(hù)盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于液中。
PCR檢測(cè)試劑盒：
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min，EP管底部可見(jiàn)白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時(shí)將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
木霉培養(yǎng)基: 475可做抑真菌、抑腫瘤研究。生物樣/鹽生植物根提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 20℃ 液氮超低溫凍結(jié)法；-80℃冰箱凍結(jié)法

 -260℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

釀酒酵母培養(yǎng)基: CM0077釀造黃酒。提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 28-30℃ 真空冷凍干燥法；定期移植法

窄蓋針層孔菌培養(yǎng)基: 14模式菌株: no子實(shí)體提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 25 定期移植法

澳大利亞平臍蠕孢科學(xué)研究模式菌株: no狗牙根葉片提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 14生長(zhǎng)條件: 25℃

百日咳博德特氏菌生長(zhǎng)條件: 37℃培養(yǎng)基: CM0119提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2模式菌株: no 真空冷凍干燥法

佩特曲霉生長(zhǎng)條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0015提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

嗜肺巴氏桿菌研究模式菌株: no兔肝臟病料提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2培養(yǎng)基: 56生長(zhǎng)條件: 37

 -261℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

多殺性巴氏桿菌科研及血清定型模式菌株: no出血性敗血癥牛提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2培養(yǎng)基: 56生長(zhǎng)條件: 37

多殺性巴氏桿菌科研及血清定型模式菌株: no巴氏桿菌病兔提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2培養(yǎng)基: 56生長(zhǎng)條件: 37

哲拉什黃桿菌產(chǎn)酶微生物/產(chǎn)脂肪酶菌株（三丁甘油酯法）模式菌株: no沉積物/深灰色沙質(zhì)沉積物提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 821生長(zhǎng)條件: 15℃

釀酒酵母培養(yǎng)基: CM0077啤酒菌。提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 28℃ -80℃冰箱凍結(jié)法

枯草芽孢桿菌生長(zhǎng)條件: 30℃培養(yǎng)基: CM0002提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法

棒桿菌 真空冷凍干燥法生長(zhǎng)條件: 28℃提供形式: 凍干物模式菌株: no培養(yǎng)基: 444

 -262℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

ThiosulfateCitrateBileSaltsSucroseAgar

Medium-sulfurbacteria

RVS 肉湯 RVS Broth 250 食品中沙門(mén)氏菌檢驗(yàn)選擇性增菌(ISO標(biāo)準(zhǔn))

胰化大豆堅(jiān)固綠瓊脂(TSFA)250g/瓶濾膜法細(xì)菌總數(shù)測(cè)定incubationmedia胰化大豆堅(jiān)固綠瓊脂(TSFA)250g/瓶濾膜法細(xì)菌總數(shù)測(cè)定

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5%乳糖發(fā)酵管  5%乳糖發(fā)酵管  20支  BR

1% NaC1阿拉伯糖發(fā)酵管  1% NaC1阿拉伯糖發(fā)酵管  20支  BR

3% NaC1阿拉伯糖發(fā)酵管  3% NaC1阿拉伯糖發(fā)酵管  20支  BR

3.5% NaC1阿拉伯糖發(fā)酵管  3.5% NaC1阿拉伯糖發(fā)酵管  20支  BR
豬鏈球菌通用型(SS-U)核酸檢測(cè)試劑盒YPDA培養(yǎng)基規(guī)格：250g用途：用于酵母菌增菌培養(yǎng)

1%聚山梨酯80-玉米瓊脂培養(yǎng)基規(guī)格：250g用途：用于白色念球菌培養(yǎng)

大豆酪蛋白瓊脂培養(yǎng)基（TSA）顆粒規(guī)格：300ml/袋*10用途：一種通用的營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基，用于各種微生物的培養(yǎng)（GB/T16294-2010）

抗生素檢定培養(yǎng)基6號(hào)規(guī)格：250g用途：用于粘菌素等的效價(jià)測(cè)定

Casman瓊脂培養(yǎng)基規(guī)格：250g用途：用于嗜血菌屬的分離培養(yǎng)

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