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當(dāng)前位置:上海撫生實(shí)業(yè)有限公司>>細(xì)胞生物學(xué)試劑>>抑制劑激活劑>> SOCE抑制劑
貨號(hào) | FS-X10570 |
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產(chǎn)品介紹:
SKF-96365是SOCE的抑制劑,能夠在結(jié)直腸癌細(xì)胞里通過(guò)引起細(xì)胞周期阻滯和凋亡,表現(xiàn)抗腫瘤活性。 注:本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn),嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途! 號(hào):130495-35-1 純度:99.73% 分子量:402.91 儲(chǔ)存條件:-20℃,有效期2年,溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。 |
中文名稱:SOCE抑制劑
英文名稱:SKF-96365 hydrochloride
產(chǎn)品規(guī)格:1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg
貨號(hào):FS-X10570
實(shí)驗(yàn)報(bào)告:
一、分離與培養(yǎng): 1、無(wú)菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span> 2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置; 3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化; 4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細(xì)胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng); | 二、免疫熒光鑒定: 1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí),棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min; 2、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min; 3、PBS沖洗細(xì)胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細(xì)胞30min; 4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗,然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜; 5、PBS沖洗細(xì)胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗, 37℃條件下放置1h; 6、用PBS沖洗3次,每次10min,最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。 |
操作規(guī)程
1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔,通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞,細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000~10000個(gè)細(xì)胞(具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目,需根據(jù)細(xì)胞的大小,細(xì)胞增殖速度的快慢等決定)。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).
2、.加入適當(dāng)濃度的0~10μL 受試化合物。
3、將96孔板在37℃,含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。
4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。
5、每孔加50μL 1× MTT 溶液,在37℃孵育4小時(shí),使MTT 還原為甲臜。
6、吸出上清液,每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解,用平板搖床搖勻。
7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度(如無(wú)570nm 濾光片,可以使用560-600nm 的濾光片)。
8、結(jié)果分析
a、細(xì)胞的存活率:將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值(*培養(yǎng)基加MTT,無(wú)細(xì)胞)或空白藥物孔OD 值(*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT,無(wú)細(xì)胞),各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示,T 為加藥細(xì)胞的OD 值,C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =(加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD)×100
b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)
培養(yǎng)操作步驟:
1.公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出,用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈,不要用紗布;
2.將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板(每孔一片)或培養(yǎng)皿中(每個(gè)平皿可放置2-3片);
3.在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí);
4.將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中,使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中;
5.將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天,當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí),將培養(yǎng)板取出,用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片,用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。
皺褶莫氏黑粉菌Snail蛋白抗體Anti-NPM1 Antibody母系蛋白4(MATN4)
費(fèi)氏中華根瘤菌分泌凋亡相關(guān)蛋白1抗體Anti-NPHS2 Antibody母系蛋白3(MATN3)
扭曲毛殼肌動(dòng)蛋白依賴染色質(zhì)調(diào)控因子SMARCD3蛋白抗體Anti-NPM2 Antibody母系蛋白2(MATN2)
大腸埃希菌線粒體載體腺核轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白6抗體Anti-NPHS2 Antibody母系蛋白1(MATN1)
鏈格孢Bcl2結(jié)合抗凋亡蛋白4抗體Anti-NPPA Antibody墨蝶呤還原(SPR)
糞腸球菌第10號(hào)染色體開放閱讀框27抗體Anti-NPM1 Antibody(PB0329)末端脫氧核糖核轉(zhuǎn)移(DNTT)
擬青霉5-羥色受體2A抗體Anti-NPPA Antibody末端補(bǔ)體復(fù)合體C5b-9(C5b-9)
葛藤根瘤菌5-脂氧合抗體Anti-NPPA Antibody膜突蛋白()
赭曲霉SH2B蛋白抗體Anti-NPPB Antibody膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(FPN)
枯草芽孢桿菌核突觸蛋白相互作用蛋白1抗體Anti-NPR1 Antibody膜聯(lián)蛋白A9(ANXA9)
斯氏土地桿菌磷化類固受體輔助活化因子-3Anti-NPS Antibody膜聯(lián)蛋白A8(ANXA8)
毛栓菌磷化血清應(yīng)答因子抗體Anti-NPY1R Antibody膜聯(lián)蛋白A7(ANXA7)
盤長(zhǎng)孢狀盤孢SH2結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)化蛋白1抗體Anti-NPY Antibody(PB0319)膜聯(lián)蛋白A6(ANXA6)
土生叢毛單胞菌磷化SH2結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)化蛋白1抗體Anti-NQO1 Antibody膜聯(lián)蛋白A5(ANXA5)
磷化SH2結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)化蛋白1抗體Anti-NR1H2 Antibody膜聯(lián)蛋白A4(ANXA4)
聚酵芽孢桿菌磷化SH2結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)化蛋白1抗體Anti-NR1H3 Antibody膜聯(lián)蛋白A3(ANXA3)
腫瘤/睪丸抗原135抗體Sphingomonasdokdonensis人臍靜脈平滑肌細(xì)胞提取物
骨誘導(dǎo)因子抗體Herpetosiphonaurantiacus人腸靜脈內(nèi)皮細(xì)胞提取物
1號(hào)染色體開放閱讀框80抗體檸檬泛菌人食管平滑肌細(xì)胞提取物
耳聾、常染色體隱性遺傳22抗體Chryseobacteriumlathyri人胃粘膜上皮細(xì)胞提取物
SOCE抑制劑粟酒裂殖酵母 2,5-二溴-3-十二烷基噻吩鈣調(diào)磷
光硬皮馬勃 1-芐基-3-活化T核因子
路普康湖冷桿 二氧化硅微管相關(guān)蛋白輕鏈3II
指狀青霉 二氧化硅腎損傷因子1
Paraconiothyrium hawaiiense Fmoc-Lys(Dnp)-OH色P450
串珠鐮孢 3--2-氟吡啶氨基
白地霉 (環(huán)基)三苯基溴化膦脂肪
耐久腸球 3-(2-氟苯基)-3-氧代-乙酯卵黃生成
科恩根霉 Fmoc-O-磷基-L-酪CD80分子
固氮 -3-乙CD86分子
枯草芽孢桿 四丁基氫氧化,30水Ⅸ
釀酒酵母 順-1,4-二-2-三磷鳥
人參土成對(duì)桿 1-叔丁氧羰基-4-甲氨基乙
節(jié)桿 2-溴-5-氟3-甲基
枯草芽孢桿 阿齊沙坦λ干擾
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