實(shí)時(shí)熒光定量PCR是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán)，利用熒光信號(hào)積累實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)整個(gè)PCR進(jìn)程，通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)對(duì)未知模板進(jìn)行定量分析的方法。實(shí)時(shí)熒光定量PCR的化學(xué)原理包括探針類(lèi)和非探針類(lèi)兩類(lèi)，探針類(lèi)是利用與靶細(xì)胞序列特異性雜交的探針來(lái)指示擴(kuò)增產(chǎn)物的增加，非探針類(lèi)是利用熒光染料或者特異性設(shè)計(jì)的引物來(lái)指示擴(kuò)增的增加。運(yùn)用該技術(shù)可以對(duì)DNA、RNA樣品進(jìn)行定量（包括定量和相對(duì)定量）和定性分析。主要服務(wù)：DNA或RNA的定量分析、基因表達(dá)差異分析、基因分型。

PCR技術(shù)的定量原理：
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擴(kuò)增曲線(xiàn)
在Real-time qPCR中，對(duì)整個(gè)PCR反應(yīng)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行了實(shí)時(shí)的檢測(cè)并記錄其熒光信號(hào)，隨著反應(yīng)的進(jìn)行，監(jiān)測(cè)到的熒光信號(hào)可以繪制成一條曲線(xiàn)，即為擴(kuò)增曲線(xiàn)。熒光擴(kuò)增曲線(xiàn)一般分為基線(xiàn)期、指數(shù)增長(zhǎng)期和平臺(tái)期。
在Real-time qPCR擴(kuò)增早期，擴(kuò)增的熒光信號(hào)被熒光背景信號(hào)所掩蓋，無(wú)法判斷產(chǎn)物量的變化，此時(shí)即為基線(xiàn)期。
PCR反應(yīng)過(guò)程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)形式增加的，隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加，最終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)形式生成模板，從而進(jìn)入“平臺(tái)期”。在該時(shí)期，擴(kuò)增產(chǎn)物已不再呈指數(shù)級(jí)的增加，PCR的終產(chǎn)物量與起始模板量之間無(wú)線(xiàn)性關(guān)系，所以根據(jù)最終的PCR產(chǎn)物量不能計(jì)算出初始模板量。
服務(wù)流程：
接受訂單及樣品——RNA提取——RNA質(zhì)量檢測(cè)——樣品cDNA合成——定量試驗(yàn)——數(shù)據(jù)分析——結(jié)果交付——售后服務(wù)。
實(shí)驗(yàn)注意事項(xiàng)：
1）RT-PCR可以檢測(cè)組織、細(xì)胞、血液、細(xì)菌等很多材料，不同的樣本有不同要求，實(shí)驗(yàn)前請(qǐng)充分溝通確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方案和樣本情況；
2）客戶(hù)盡可能提供實(shí)驗(yàn)的背景信息、物種、基因準(zhǔn)確的名稱(chēng)和ID號(hào)；
3）客戶(hù)盡量不要提供DNA或RNA樣品。
4）樣本保存于液氮或干冰，也可以保存于液中。
PCR檢測(cè)試劑盒：
(一)總RNA提取
取液氮凍存腦組織置于玻璃勻漿器中，按100g:3ml的比例加入Trizol試劑，嚴(yán)格按照TrizolRNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)的流程進(jìn)行。
(1)加Trizol（按3ml/100mg組織，寧多勿少）置于玻璃勻漿器中勻漿后，冰浴10-1min。
(2)移入1.5mlEP管中，4ºC 13000g離心10min。
(3)上清液移至另一EP管中，室溫放置10-15min。
(4)加入0.2ml/1mlTrizol，振蕩15s，室溫置5min。
(5)4ºC 12000g離心15min。
(6)仔細(xì)吸取上層水相，移至新的EP管中。
(7)加入0.5ml異丙醇/1mlTrizol，振搖，置室溫10min。
(8)4ºC 12000g離心10min，EP管底部可見(jiàn)白色沉淀物。
(9)棄上清，紙巾吸干，加入75%乙醇1ml，振搖，充分洗滌沉淀。
(10)4ºC 11000g離心5min。
(11)吸盡乙醇，空氣干燥10min（可離心加快干燥，盡量吸盡離心液體）。
(12)半透明時(shí)將RNA溶于去核酸酶的水20ul中（可吹打混勻），-20ºC凍存?zhèn)溆谩?/span>
(13)所提取的總RNA用核酸蛋白分析儀分析RNA含量和純度，所有標(biāo)本260/280nm吸光度的比值均為1.8-2.0。
(14)取所提取的總RNA用1%瓊脂糖凝膠電泳，顯示出清晰的28s和18s兩條rRNA。
特異性強(qiáng)
PCR反應(yīng)的特異性決定因素為：
①引物與模板DNA特異正確的結(jié)合；
②堿基配對(duì)原則；
③Taq DNA聚合酶合成反應(yīng)的忠實(shí)性；
④靶基因的特異性與保守性。
 -333℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

亞德食烷菌南大西洋細(xì)菌模式菌株: no沉積物/TVMC沉積物(45-50cm)提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 512生長(zhǎng)條件: 25℃

大腸埃希氏菌生長(zhǎng)條件: 37℃培養(yǎng)基: 33提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no 真空冷凍干燥法

北極海單胞菌潛在的有機(jī)污染物降解菌/分離自石油-PAHs富集菌群模式菌株: no沉積物/深海沉積物提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 821生長(zhǎng)條件: 4℃

枯草芽孢桿菌枯草亞種生長(zhǎng)條件: 30℃培養(yǎng)基: 0002提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1模式菌株: no 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

釀酒酵母生長(zhǎng)條件: 25-28℃培養(yǎng)基: 0013提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1模式菌株: no

胎兒別樣謝瓦氏菌培養(yǎng)基: 0002模式菌株: no底泥提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 28℃ 液氮超低溫凍結(jié)法;真空冷凍干燥法

 -334℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

泊庫(kù)島食烷菌有機(jī)污染物降解菌/石油烴類(lèi)降解菌模式菌株: no水樣/海水提供形式: 凍干物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: 472生長(zhǎng)條件: 28℃

擬諾卡氏菌 真空冷凍干燥法生長(zhǎng)條件: 37℃提供形式: 凍干物模式菌株: no培養(yǎng)基: 70

五通橋毛霉腐乳。模式菌株: no腐乳提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1培養(yǎng)基: CM0085生長(zhǎng)條件: 28-30℃

球孢鏈霉菌球孢亞種培養(yǎng)基: 12模式菌株: no植物根際提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級(jí): 1生長(zhǎng)條件: 28-30 定期移植法

豬鏈球菌用于研究教學(xué)模式菌株: no培養(yǎng)基提供形式: 凍結(jié)物安全等級(jí): 2培養(yǎng)基: 396生長(zhǎng)條件: 37

莫斯科沙門(mén)氏菌培養(yǎng)基: CM00519,12　g,q　-提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 37℃ -80℃冰箱凍結(jié)法；真空冷凍干燥法

 -335℃冰箱凍結(jié)；真空冷凍干燥

福氏志賀氏菌培養(yǎng)基: CM0051B　5　V　7...提供形式: 凍干物安全等級(jí): 2模式菌株: no生長(zhǎng)條件: 37℃ 真空冷凍干燥法

對(duì)甲酚p-CresolCP500ml

ER0812MboI1500 units4

P6782-100mgPeroxidase, Horseradish (HRP) 辣根過(guò)氧化物酶9003-99-0100mg

BCA Protein Assay Kit500T

馬來(lái) (順丁烯二)100g

有機(jī)擔(dān)體403403 organic supportGC60-80目25g

ER0922Bsh1236I (BstUI)2500 units11

D2510-10GDexy7nocholic 脫氧膽201-478-510g

幾丁質(zhì)(甲殼素)10g

Uracil50g

大鼠血小板衍生生長(zhǎng)因子(PDGF)ELISA試劑盒 ，英文名： PDGF ELISA Kit

人抗類(lèi)固醇抗體(SCA)ELISA檢測(cè)試劑盒Humansteroidcellaoaibody,SCAELISAKit 96T/48T

大鼠Ras相關(guān)C3肉素底物1(RAC1)免疫試劑盒 Rat Ras-related C3 Botulinum Toxin Subsate 1,RAC1 ELISA Kit

CLIAKitforSP-A(MousePulmonarysurfatca-associatedproteinA)ELISAKit小鼠肺表面活性物質(zhì)相關(guān)蛋白A規(guī)格：48T/96T

肉類(lèi)總?cè)楸壬ǘ繖z測(cè)試劑盒20次

ELISAKitAVP人精氨加壓素規(guī)格：48T/96T
類(lèi)鼻疽伯克霍爾德菌(BP)核酸檢測(cè)試劑盒D-核糖規(guī)格：25g用途：微生物指示劑

化MRS瓊脂（AMRSA）規(guī)格：250g用途：用于食品中乳菌的分離培養(yǎng)或計(jì)數(shù)

鳥(niǎo)氨脫羧酶-O157菌生化鑒定規(guī)格：20支詳情介紹

抗生素檢定培養(yǎng)基3號(hào)（usp）規(guī)格：250g用途：用于藥品抗生素效價(jià)測(cè)定

Kovacs氏靛基質(zhì)試劑盒規(guī)格：5ml*2拉丁屬名：Kovacs氏靛基質(zhì)試劑盒

M--H瓊脂培養(yǎng)基規(guī)格：250g拉丁屬名：Mueller-Hinton Broth Medium