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貨號(hào)	FS-X10404

培養(yǎng)操作步驟：

1．公司僅用于科研用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無(wú)菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；

2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個(gè)平皿可放置2-3片）；

3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時(shí)；

4．將經(jīng)過(guò)計(jì)數(shù)的細(xì)胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；

5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當(dāng)貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時(shí)，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進(jìn)行快速固定以及免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)。

中文名稱：Smad3抑制劑(SIS3)

英文名稱：SIS3

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg

貨號(hào)：FS-X10404

產(chǎn)品介紹:

英文名稱：SIS3

產(chǎn)品規(guī)格：1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg

SIS3是一個(gè)強(qiáng)的和選擇性的Smad3抑制劑，也是強(qiáng)的Nox4啟動(dòng)子的調(diào)節(jié)器。

注：本品僅可用于科研實(shí)驗(yàn)，嚴(yán)禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！

號(hào)：521984-48-5

純度：98.0%

分子量：489.99

儲(chǔ)存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請(qǐng)盡量在一個(gè)月內(nèi)使用。

實(shí)驗(yàn)報(bào)告：

一、分離與培養(yǎng)：

1、無(wú)菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大??；

2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細(xì)胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；

3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復(fù)此步驟2-3次，直至組織*被消化；

4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過(guò)濾細(xì)胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細(xì)胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；

5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實(shí)驗(yàn)需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；

二、免疫熒光鑒定：

1、待心房肌細(xì)胞生長(zhǎng)至80%融合時(shí)，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細(xì)胞15min；

2、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；

3、PBS沖洗細(xì)胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細(xì)胞30min；

4、按1: 100的比例稀釋?duì)?actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細(xì)胞過(guò)夜；

5、PBS沖洗細(xì)胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；

6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。

Marivita litorea凋亡誘導(dǎo)受體PLEKHG5抗體Anti-Alkaline phosphatase/ALPL Antibody雌激受體(ER)

長(zhǎng)雙歧桿菌蛋白質(zhì)磷2A-B55抗體Anti-ALKBH1 Antibody雌激硫轉(zhuǎn)移(SULT1E1)

棕櫚酰蛋白水解2抗體Anti-ALKBH5 Antibody雌激(E)

大腸桿菌屬多谷酰結(jié)合蛋白1抗體Anti-ALOX12 Antibody雌二受體(ER)

慢生根瘤菌豬藍(lán)耳病病抗體Anti-ALOX12 Antibody雌二(E2)

炭疽芽胞桿菌對(duì)氧磷3抗體Anti-ALOX15 Antibody(PB0007)垂體腺環(huán)化激活肽(PACAP)

嗜冷桿菌屬蛋白質(zhì)精亞型2抗體Anti-ALOX5 Antibody垂草扁桃(VMA)

杏鮑菇磷乙轉(zhuǎn)移2抗體Anti-ALOX5 Antibody串珠(HSPG2)

白靈菇磷脂酰肌結(jié)合網(wǎng)格蛋白組裝蛋白抗體Anti-ALPL Antibody穿孔/成孔蛋白(PRF1/PFP)

病研所芽孢桿菌絲/蘇蛋白磷1調(diào)節(jié)亞基10抗體Anti-Alpha B Crystallin/CRYAB Antibody穿孔/成孔蛋白(PF/PFP)

枯草芽孢桿菌色氧化裝配因子PET112抗體Anti-ALOX5 Antibody穿孔(PF)

泡盛曲霉磷化蛋白激C抗體 PKC εAnti-ALPP Antibody遲現(xiàn)抗原4(VLA4)

靈芝(紅芝, 赤芝)Ⅱ型膠原α1 N端前體肽抗體Anti-AMACR Antibody程序性死亡因子4(PDCD4)

大腸埃希菌腫瘤錯(cuò)配修復(fù)基因PMS1抗體Anti-AMD1 Antibody程序性死亡因子配體1(PD-L1/CD274)

褐孢大禿馬勃p400蛋白抗體Anti-AMBP Antibody程序性死亡-1(PD-1)

不動(dòng)桿菌血小板源性生長(zhǎng)因子C抗體Anti-AMBP Antibody成纖維生長(zhǎng)因子8(FGF8)

芽孢桿菌Bacillus│sp. 質(zhì)量規(guī)格：>99%,標(biāo)準(zhǔn)品

小單孢菌屬菌種Micromonospora│sp. 質(zhì)量規(guī)格：HPLC≥98%，標(biāo)準(zhǔn)品

釀酒酵母Saccharomyces│cerevisiae 質(zhì)量規(guī)格：≥98%,BR
Smad3抑制劑(SIS3)史氏芽孢桿 2,5-二苯肼鹽鹽磷化鈣調(diào)依賴性蛋白激2

Erwinia persicina 2-溴苯肼鹽鹽紅生成受體

頭狀莖點(diǎn)霉 5-氨基-2-甲輕脂酞輔脫氫

金針菇 Dichlorobis(2-(二苯基膦)乙)釕(II)ATP合成

頂黑毛殼 4-溴-2,3-二甲核因子κB抑制物激

出芽短梗霉(黑酵母）花生舒緩激肽

大豆慢生根瘤花生痢疾密螺旋體

釀酒酵母 2，凝血原

檸檬兩面神 5-氟-2-缺氧誘導(dǎo)因子

根霉高哌唾液淀粉α1

枯草芽孢桿 10-溴癸IIA分泌型磷脂A2

健康皮張抗原（兔皮A） 2,4,6-三氟異苯酯煙酰腺二核

*鎖擲酵母 3-氟-4-(甲氧基羰基)苯20-羥化二十碳四烯

釀酒酵母 2-溴-5-(三氟甲基)吡啶糖原合成激3

陰溝腸桿 4-氨基肉桂乙酯巨噬來(lái)源的趨化因子22
操作規(guī)程

1、在96孔板加入細(xì)胞100μL/孔，通常細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升2000個(gè)細(xì)胞，細(xì)胞毒性實(shí)驗(yàn)每孔加入100微升5000～10000個(gè)細(xì)胞（具體每孔所用的細(xì)胞的數(shù)目，需根據(jù)細(xì)胞的大小，細(xì)胞增殖速度的快慢等決定）。置37℃ 5%CO2細(xì)胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)24小時(shí).

2、.加入適當(dāng)濃度的0～10μL 受試化合物。

3、將96孔板在37℃，含5% CO2空氣及100%濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中孵育適當(dāng)時(shí)間。

4、將5×MTT 用稀釋液稀釋成1× MTT 溶液。

5、每孔加50μL 1× MTT 溶液，在37℃孵育4小時(shí)，使MTT 還原為甲臜。

6、吸出上清液，每孔加150μL DMSO 使甲臜溶解，用平板搖床搖勻。

7、酶標(biāo)儀在570nm 波長(zhǎng)處檢測(cè)每孔的光密度（如無(wú)570nm 濾光片，可以使用560-600nm 的濾光片）。

8、結(jié)果分析

a、細(xì)胞的存活率：將各測(cè)試孔的OD 值減去本底OD 值（*培養(yǎng)基加MTT，無(wú)細(xì)胞）或空白藥物孔OD 值（*培養(yǎng)基加受試藥物的不同稀釋度加MTT，無(wú)細(xì)胞），各重復(fù)孔的OD 值取平均數(shù)±SD。細(xì)胞的存活率以T/C%表示，T 為加藥細(xì)胞的OD 值，C 為對(duì)照細(xì)胞的OD 值。細(xì)胞存活率% =（加藥細(xì)胞OD/對(duì)照細(xì)胞OD）×100

b、求出T/C = 50% 時(shí)的藥物濃度(IC50)及T/C = 10%時(shí)的藥物濃度(IC90)