TRzol（總 RNA 提取試劑）
商品屬性：

商品介紹：

儲(chǔ)存條件：

TRzol 在室溫下能穩(wěn)定保存 12 個(gè)月。盡管如此，為達(dá)到最佳效果，我們建議保存 在 2-8℃的環(huán)境下。

重要提示：

有毒物接觸皮膚或者不慎吞服，會(huì)導(dǎo)致灼傷。一旦接觸皮膚后立即以大量的洗滌 劑和清水清洗。若感不適，看醫(yī)生并尋求和其他成分的正確治療方案。

產(chǎn)品介紹：

TRzol試劑是直接從細(xì)胞或組織中提取總RNA的試劑。它在破碎和裂解細(xì)胞時(shí)能保 持RNA的完整性。加入氯仿后離心，樣品分成水樣層、中間層和有機(jī)層。RNA存在于 水樣層中。收集上面的的水樣層后，RNA可以通過(guò)異丙醇沉淀來(lái)回收。 無(wú)論是人、動(dòng)物、植物還是細(xì)菌，該方法對(duì)少量及大量的組織和細(xì)胞均有較好的 分離效果。TRzol 試劑操作上的簡(jiǎn)單性允許同時(shí)處理多個(gè)樣品。所有的操作可以在一 小時(shí)內(nèi)完成。TRzol 抽提的總 RNA 能夠避免 DNA 和蛋白的污染，可用于 RNA 印跡分 析、斑點(diǎn)雜交、poly(A)+篩選、體外翻譯、RNA 酶保護(hù)分析和分子克隆。如果是用于 PCR，當(dāng)兩條引物位于單一外顯子內(nèi)時(shí)，建議用擴(kuò)增級(jí)的 DNase I 來(lái)處理抽提的總 RNA。

TRzol試劑能促進(jìn)不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如，從大鼠肝臟 抽提的RNA經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色，可見(jiàn)許多介于7kb和15kb之間不連續(xù) 的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分)，兩條優(yōu)勢(shì)核糖體的分子量約在5 kb (28S)和2

kb(18S)，低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間 (tRNA, 5S)。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時(shí)其A260/A280比值≥1.8。

注意事項(xiàng)：

1.從少量的組織(1~10mg)或細(xì)胞(102-104 個(gè))中分離 RNA 樣品：往組織或細(xì)胞中加入 800µl TRzol。待樣品裂解后，加入氯仿并進(jìn)行步驟 2 中的抽提操作。在用異丙醇沉淀 RNA 之前，加入 5~10μg 無(wú) RNA 酶的 glycogen 作為水樣層的載體。為降低其黏度在加入氯仿前用 26 號(hào)注射器抽吸兩次以切斷基因組 DNA。Glycogen 會(huì)留在水樣層中并和 RNA 共析出。在濃縮到4mg/ml 之前它不會(huì)抑制逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)第一鏈的合成也不會(huì)抑制 PCR。

2.在勻漿化后和加入氯仿之前，樣品可以在-60℃或者-70℃保存至少一個(gè)月。將RNA 沉淀溶于 75%的乙醇在 2-8℃至少可以保存一周，在-5—-20℃下至少可保存一年。

3.用 TRzol 抽提 RNA 時(shí)要戴手套和護(hù)眼罩。避免接觸皮膚和衣服。在化學(xué)通風(fēng)櫥完成操作。避免呼吸道吸入。如無(wú)例外，室溫保持在 15~30℃的條件下。

自備試劑：

氯仿、異丙醇、75%乙醇(RNase-Free water 配制)、RNase-Free water（將水加入無(wú)RNA 酶的玻璃瓶中，加入 DEPC 至 0.1% (V/V)。放置過(guò)夜并高壓滅菌）。0.5% SDS溶液(RNase-Free water 配制)（可選）。

操作步驟：

1.樣品預(yù)處理

a. 植物組織：以葉片 RNA 提取為例。取新鮮葉片在液氮中充分研磨或?qū)⑷~片剪碎后直接在 TRzol 試劑中研磨，研磨要迅速，最好不要超過(guò) 1min。大約 100mg 葉片使用 1ml TRzol 試劑。

b. 動(dòng)物組織：以鼠肝臟 RNA 提取為例。取新鮮或-70℃凍存組織，每 30-50mg 組織加入 1ml TRzol 試劑，用勻漿儀進(jìn)行勻漿處理。樣品體積一般不要超過(guò) TRzol 試劑體積的 10%。

c.單層生長(zhǎng)的細(xì)胞：直接往直徑3.5 cm的培養(yǎng)板中加入1ml的TRzol裂解細(xì)胞，通過(guò)移液管分次移出細(xì)胞裂解物。依據(jù)培養(yǎng)板的面積而不是依據(jù)細(xì)胞的數(shù)量來(lái)決定所需的TRzol量（每10cm2加1ml）。當(dāng)TRzol量不足時(shí)可導(dǎo)致抽提的RNA中污染有DNA。

d.懸浮生長(zhǎng)的細(xì)胞：通過(guò)離心來(lái)沉淀細(xì)胞。在TRzol試劑中用移液管反復(fù)吹打來(lái)裂解細(xì)胞。每5~10×10

6的動(dòng)物細(xì)胞，植物或酵母菌細(xì)胞或每1×10

7細(xì)菌加1ml的TRzol。在加入TRzol前應(yīng)避免洗滌細(xì)胞，因?yàn)槟菢訒?huì)增加mRNA降解的可能性。破裂某些酵母菌和細(xì)菌可能需要使用勻漿器。

2.分離階段 將勻漿樣品在15 -30°C條件下孵育5 min以使核蛋白體分解。（可選步驟：4℃ 12,000rpm(~13,400×g) 離心10min，取上清。 注意：如果樣品中含有較多蛋白、脂肪、 多糖或肌肉、植物結(jié)節(jié)部分等，可離心去除。 離心得到的沉淀中包括細(xì)胞外膜、多糖、 高分子量DNA，上清中含有RNA。處理脂肪組織樣品時(shí)，上層是大量油脂，應(yīng)除去。 取澄清的勻漿溶液進(jìn)行下一步操作。）每1ml TRzol加0.2ml氯仿。蓋緊樣品管蓋，用手 用力搖晃試管15秒并將其在室溫下孵育2-3 min。4℃ 12,000rpm(~13,400×g)離心15 min。 離心后混合物分成三層：下層氯仿層，中間層，上層無(wú)色的水樣層。RNA存在于 上層水樣層當(dāng)中。水樣層的容量大約為所加TRzol容量的60%。

3.RNA 的沉淀 將水樣層轉(zhuǎn)移到新的離心管中，如果希望分離DNA和蛋白，有機(jī)層和中間層同樣 要予以保留。通過(guò)將水樣層和異丙醇混合來(lái)沉淀RNA。每1ml TRzol加入0.5ml異丙醇， 混勻。將混合的樣品在15 -30°C條件下孵育10min，4℃ 12,000rpm(~13,400×g)離心15 min。RNA沉淀在離心前通常不可見(jiàn)，離心后形成一膠狀片狀沉淀附著于試管壁和管底。

4.RNA 的漂洗

移去上層懸液。用75%的乙醇(RNase-Free water配制)洗滌RNA沉淀1-2次，每1ml 的TRzol至少加1ml的75%乙醇。旋渦振蕩混合樣品并在2~8°℃下以不超過(guò)7,500×g的離 心力高速冷凍離心5 min。

5.RNA 的再溶解 室溫簡(jiǎn)單干燥RNA沉淀，不要在真空管里離心干燥RNA。尤為重要的是，不能讓 RNA沉淀干燥那樣會(huì)極大地降低它的可溶性。部分溶解的RNA樣品其OD260/OD280 比值<1.6。用移液管分幾次移取RNase-Free water或0.5%SDS溶(RNase-Free water配制) 來(lái)溶解RNA（如果RNA以后要用于酶切反應(yīng)時(shí)，避免使用SDS。）RNA還能被100%甲 酰胺（除去離子）再溶解并保存在-70°C。

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